Galectin-3在子宮內膜異位癥的表達及調節(jié).pdf

1、子宮內膜異位癥(內異癥，EMT)是一種婦科常見病，主要臨床表現(xiàn)為痛經(jīng)和不孕。內異癥是引起不孕的重要原因之一，內異癥引起的不孕約占不孕總數(shù)的30～50％，內異癥患者不孕發(fā)生率為非內異癥人群的20倍。由于內異癥的發(fā)病機制及與不孕癥的關系尚不清楚，單純藥物或手術治療對其生育狀況的改善效果并不理想，故需進一步研究內異癥引起不孕的機理，為內異癥不孕尋找新的診治靶點。輔助生育技術結果研究結果顯示內異癥不孕患者的胚胎著床率顯著低于非內異癥婦女；而對內

2、異癥動物模型的研究也表明內異癥在位子宮內膜缺少子宮內膜容受性的分子標記，如整合素α<,v>β<,3>。因此，有學者認為內異癥患者在位子宮內膜容受性的改變可能是其導致不孕的重要原因之一。Galectin-3(Ga1-3)是一種糖結合蛋白，介導細胞與細胞、細胞與細胞外基質的相互作用，參與多種生理和病理過程。近年來Ga1-3在細胞黏附、分化、遷移和增殖方面的作用使其在生殖領域的作用逐漸被人們重視。然而，Ga1-3是否參與調節(jié)內異癥子宮內膜容受

3、性的改變國內外尚未見報道。 為進一步明確子宮內膜容受性的變化與內異癥患者不孕之間的關系，本研究深入系統(tǒng)地研究了子宮內膜容受性相關基因Ga1-3在內異癥患者在位子宮內膜中的表達變化及其調控機理。通過研究Ga1-3在內異癥患者在位內膜中的表達變化、卵巢甾體激素對該基因表達的調節(jié)以及該基因表達與生育調節(jié)重要信號通路之間的關系，來明確Ga1-3與內異癥性不孕癥的關系，進～步探索內異癥患者在位子宮內膜容受性的改變與內異癥患者不孕之間的關系

4、，為內異癥不孕的病因研究和新的診治靶點研究提供重要線索。 第一部分 內異癥患者在位內膜Galeetin-3的表達變化探討Gal-3在內異癥患者在位子宮內膜中的表達及意義。 材料與方法收集增生晚期和分泌期的EMT患者和正常對照的人子宮內膜標本，分別采用實時定量反轉錄-聚合酶鏈反應(Real-time RT-PCR)、免疫組化和Western blot檢測內異癥患者在位內膜及正常對照中Gal-3 mRNA及蛋白水平的

5、表達變化，比較其表達差異。 結果 EMT患者在位內膜及對照組子宮內膜中均可檢測到Gal-3 mRNA的表達。正常內膜和EMT’在位內膜組織分泌期Gal-3的mRNA表達均高于增生期(P<0.001)。與增生晚期和分泌中期正常子宮內膜相比，在位內膜Gal-3 mRNA表達顯著下降(P<0.001)。Gal-3蛋白定位于子宮內膜的腔上皮細胞、腺上皮細胞和間質細胞。EMT患者在位內膜Gal-3蛋白表達低于正常對照組，其表達在分

6、泌期高于增生期。 結論 內異癥患者在位子宮內膜Gal-3 mRNA和蛋白表達降低，可能影響子宮內膜容受性從而導致不孕。 目的 第二部 EMT在位子宮內膜細胞表達Galeetin-3的體外研究探討 Gal-3在體外培養(yǎng)的EMT患者在位子宮內膜腺上皮細胞和間質細胞中的表達及意義。 材料與方法 收集人子宮內膜，用膠原酶消化法分離培養(yǎng)子宮內膜腺上皮細胞和間質細胞。用免疫細胞化學法進行細胞純

7、度鑒定。逆轉錄．聚合酶鏈反應(RT-PCR)和Westem blot檢測。EMT患者在位內膜及正常對照中Gal-3 mRNA及蛋白水平的表達變化，比較其表達差異。 結果 分離的上皮細胞和間質細胞純度達90％以上。無論是正常對照組還是EMT’組，子宮內膜腺上皮細胞Gal-3 mRNA表達均比間質細胞高(P<0.01)。子宮內膜腺上皮和子宮內膜間質細胞細胞中Gal-3 mRNA表達：在對照組分泌期高于增生期，EMT患者分泌期

8、明顯低于對照(P<0.01)。EMT分泌期與增生期患者中Gal-3 mRNA表達分別低于同期對照組(P<0.05)。EMT組分泌期子宮內膜腺上皮細胞，Gal-3蛋白表達比對照組明顯下降(P<0.05)。對照組和EMT組子宮內膜腺上皮細胞Gal-3蛋白表達比子宮內膜間質細胞高(P<0.05)。 結論 子宮內膜腺上皮和間質細胞都可以合成、分泌Gal-3。分泌期子宮內膜腺上皮細胞Gal-3 mRNA和蛋白表達比間質細胞多。EM

9、T患者Gal-3表達降低。 第三部分雌孕激素對EMT在位子宮內膜細胞表達Galeetin-3的調控作用 目的探討雌、孕激素對體外培養(yǎng)的EMT子宮內膜腺上皮細胞中Gal-3表達的影響。 材料與方法 體外分離培養(yǎng)的EMT和正常人子宮內膜腺上皮細胞，平行設立對照組和處理組，處理組分別給予不同濃度(10<'-10>M～10<'-6>M)的雌激素(17β-E<,2>)和(10<'-9>M～10<'-5>M)孕激素(

10、MPA)處理24小時，觀察其對Gal-3轉錄水平的影響。10<'-8>M雌激素、10<'-7>M孕激素和10<'-8>M雌激素+10<'-7>M孕激素聯(lián)合處理，分別作用24、48、72小時后進行逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測Gal-3轉錄水平的表達。結果正常人子宮內膜腺上皮細胞經(jīng)10<'-9>M(2.748±0.378)、10<'-8>M(6.767±0.737)、10<'-7>M(3.732±0.826)、10<'-6>M(2

11、.730±1.023)17β-E<,2>處理后Gal-3表達增加，與未處理組相比差異有顯著性(P<0.05)。而10<'-10>M(2.193±1.270)E<,2>處理后與未處理組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。10<'-9>M(4.560±0.566)、10<'-8>M(6.597±0.735)、10<'-7>M(10.609±0.335)、10<'-6>M(3.946±0.860)、10<'-5>M(2.263±0.966)

12、MPA處理后Gal-3表達增加，與未處理組相比差異有顯著性(P<0.01)。正常內膜腺上皮細胞經(jīng)雌、孕和雌孕聯(lián)合處理不同時間后，Gal-3表達上調順序依次為處理72h>48h>24h>未處理組，與未處理組相比差異有顯著性(P<0.01)。Gal-3的表達隨處理時間延長而逐漸增加，呈時間依賴性。與未處理組相比，Gal-3表達為孕激素組>雌孕激素聯(lián)合組>雌激素組(P<0.01)。EMT組經(jīng)雌、孕和雌孕激素聯(lián)合處理不同時間后，Gal-3表達上

13、調順序依次為處理24h>48h>72h>未處理組，差異有顯著性(P<0.01)。雌孕激素聯(lián)合處理組、孕激素處理組和雌激素處理組Gal-3的表達不隨時間依賴性下降。雌孕激素聯(lián)合組Gal-3表達高于雌激素組、孕激素組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，但雌激素處理組與孕激素處理組二者之間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 結論 雌激素和孕激素能上調Gal-3的表達，在正常對照組其上調作用呈劑量依賴性。孕激素處理后Gal-

14、3表達上調最明顯，雌激素削弱孕激素對Gal-3表達的上調作用。在EMT患者子宮內膜腺上皮細胞中Gal-3表達隨處理時間的延長而下降；孕激素處理組Gal-3表達低于雌孕激素聯(lián)合處理組。EMT患者Gal-3表達對孕激素刺激不敏感可能與EMT患者Gal-3表達水平下降有關，這可能是導致不孕的重要機理之一。 第四部分NF-kB信號轉導通路對EMT在位子宮內膜細胞表達 目的Galeetin-3的調控作用研究發(fā)現(xiàn)核因子kappa B

15、(NF-kB)信號轉導通路在胚胎著床中起重要作用。本實驗旨在了解Gal-3在人類子宮內膜表達以及其上游調節(jié)是否與NF-kB信號通路有關。 材料與方法 體外分離培養(yǎng)的EMT和正常人子宮內膜腺上皮細胞，給予NF-kB抑制劑MG132處理1小時后，再分別給予正常培液、10<'-8>M雌激素、10<'-7>M孕激素和雌孕激素聯(lián)合處理24小時后Western blot檢測Gal-3蛋白水平的表達。 結論 Gal-3