丙戊酸鈉增強(qiáng)宮頸癌細(xì)胞Hela放射敏感性的實(shí)驗(yàn)性研究.pdf

1、目的：放射治療作為一種傳統(tǒng)治療手段，在腫瘤的綜合治療中具有重要地位，在我國，大約70％的腫瘤需要放射治療的參與。腫瘤對放射線敏感性差或瘤床周圍正常組織對放射耐受性低往往導(dǎo)致放療效果不理想。研制良好的放射增敏劑是提高放療效果的一個(gè)重要途徑，也成為腫瘤放射學(xué)的前沿課題。近年來，已有不少研究證明組蛋白去乙?；敢种苿?histone deacetylase inhibitors，HDACIs)可通過抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)凋亡、抑制腫瘤血管生成

2、及轉(zhuǎn)移、降低腫瘤侵襲力等機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤作用，與放射聯(lián)合還有放射增敏作用。HDACIs放射增敏的機(jī)制復(fù)雜，至今還未完全闡明。丙戊酸鈉(valproic acid，VPA)一直以來用于癲癇的治療，最近發(fā)現(xiàn)其具有抑制HDAC活性的作用，因其半衰期長、生物利用度高、有效血藥濃度低、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)，而顯示出良好的臨床應(yīng)用前景。故本實(shí)驗(yàn)選擇其作為HDACIs的代表，進(jìn)一步闡明其放射增敏的機(jī)制，并為臨床用藥提供指導(dǎo)。 方法：不同濃度VPA(

3、0.25mmol/L、0.5mmol/L、1mmol/L、2mmol/L、4mmol/L)處理宮頸癌細(xì)胞系Hela不同時(shí)間(1d、2d、3d、4d、5d)后，通過MTT法檢測VPA對Hela細(xì)胞的增殖抑制作用；倒置相差顯微鏡觀察不同濃度VPA作用2d后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；0.25mmol/LVPA作用Hela細(xì)胞24h后，克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察VPA的放射增敏作用；流式細(xì)胞儀檢測不同濃度VPA作用后細(xì)胞周期分布及細(xì)胞凋亡率的變化；半定量RT-PC

4、R測定Caspase-3及Bcl-2基因的表達(dá)；Western Blot檢測caspase-3及Bcl-2蛋白的表達(dá)，了解VPA誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的具體途徑。 結(jié)果：HDAC抑制劑VPA對宮頸癌細(xì)胞系Hela有增殖抑制作用，且呈濃度、時(shí)間依賴性；經(jīng)VPA處理2d后，Hela細(xì)胞逐漸縮小變成長梭形、胞膜皺縮、貼壁不良，有明顯凋亡趨勢；VPA在0.25mmol/L濃度時(shí)，對Hela細(xì)胞的毒性較低，但有放射增敏作用，克隆形成率明顯減少(P<

5、0.05)；VPA聯(lián)合8GyX線照射組細(xì)胞存活曲線與單純照射組曲線相比，“肩”區(qū)減小，VPA抑制Hela細(xì)胞對放射致DNA亞致死損傷的修復(fù)能力。VPA能夠誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡，阻滯細(xì)胞于G2/M期，同時(shí)抑制細(xì)胞增殖；VPA無論在轉(zhuǎn)錄水平，還是翻譯水平都上調(diào)caspase-3的表達(dá)，并可見蛋白裂解產(chǎn)物，表明VPA可以促進(jìn)caspase-3的活化，同時(shí)下調(diào)bc1-2的表達(dá)。 結(jié)論： HDAC抑制劑VPA對宮頸癌細(xì)胞系Hela有增殖抑