RNAi沉默IGF-1R表達(dá)對宮頸癌Hela細(xì)胞生長和藥物敏感性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、碩士學(xué)位論文論文題目RNAi沉默IGF1R表達(dá)對宮頸癌Hela細(xì)胞生長和藥物敏感性的實(shí)驗(yàn)研究研究生姓名武煒指導(dǎo)教師姓名申詠梅專業(yè)名稱臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)研究方向腫瘤基因治療論文提交日期2013年3月RNAi沉默IGF1R表達(dá)對宮頸癌Hela細(xì)胞生長和藥物敏感性的實(shí)驗(yàn)研究中文摘要IRNAi沉默IGF1R表達(dá)對宮頸癌Hela細(xì)胞生長和藥物敏感性的實(shí)驗(yàn)研究中文摘要目的：的：宮頸癌是最常見的女性生殖道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率已超過結(jié)直腸癌，僅次于乳腺癌

2、，躍居女性惡性腫瘤的第二位。目前治療宮頸癌傳統(tǒng)的方法是手術(shù)、放療和化療，但作用效果有限且副作用明顯，而近幾年來興起的RNA干擾（RNAi）技術(shù)給宮頸癌的治療帶來了新的希望。本課題選擇與胰島素樣生長因子（IGFs）信號傳導(dǎo)通路有關(guān)的胰島素樣生長因子1受體（IGF1R）作為研究對象，利用RNAi技術(shù)，通過構(gòu)建IGF1RshRNA重組質(zhì)粒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染人宮頸癌Hela細(xì)胞，體內(nèi)、外觀察沉默IGF1R基因?qū)ela細(xì)胞生長的影響，并聯(lián)合化療藥物順

3、鉑刺激，以檢測其敏感性變化，為進(jìn)一步研究宮頸癌的基因治療奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法：法：①根據(jù)GenBank中IGF1R基因的cDNA序列，通過軟件分析IGF1RmRNA結(jié)構(gòu)篩選出四個擬干擾靶位點(diǎn)，并設(shè)計(jì)四條干擾序列和一條與人類任何基因均無同源性的陰性對照序列，并將其構(gòu)建成IGF1RshRNA重組質(zhì)粒表達(dá)載體，經(jīng)測序和酶切鑒定后，提取各重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞；②實(shí)驗(yàn)分為六組，即pGPU6IGF1R1組、pGPU6IGF1R2組、pGPU6IG

4、F1R3組、pGPU6IGF1R4組、pGPU6NC組和空白對照Blank組，分別進(jìn)行體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)；③瞬時轉(zhuǎn)染24h、48h、72h時，熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀分別檢測各組細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率；RTPCR檢測各組細(xì)胞IGF1R和MMP9mRNA的表達(dá)；流式細(xì)胞儀檢測IGF1R蛋白表達(dá)；Hoechst33258檢測各組轉(zhuǎn)染細(xì)胞的凋亡情況；CCK8檢測各組轉(zhuǎn)染細(xì)胞的增殖能力及對順鉑（DDP）刺激的敏感性，根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果從四條干擾序列中選擇一條干擾效