洛鉑誘導(dǎo)宮頸癌SiHa細(xì)胞凋亡與增強(qiáng)射線敏感性的研究.pdf

1、目的：
　　探討洛鉑抑制宮頸癌SiHa細(xì)胞系（cervical cancer cell line SiHa，SiHa）增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及增強(qiáng)細(xì)胞射線敏感性的作用及機(jī)制。
　　方法：
　　1.以0、1、2.5、5、10、20μmol/L濃度的洛鉑對(duì)SiHa細(xì)胞的作用24、48和72 h，利用四氮唑溴鹽比色試驗(yàn)[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetra-zoli

2、umromide，MTT]檢測(cè)洛鉑對(duì)宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖率的影響。
　　2.選取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的SiHa細(xì)胞接受洛鉑處理，依次接受0、2、4、6、8 Gy劑量的X射線照射48小時(shí)，利用單克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)洛鉑對(duì)SiHa細(xì)胞的射線敏感性影響。
　　3.依照處理方式的不同，依次分為空白組、洛鉑組（5μmol/L）、照射組（6 Gy）和洛鉑（5μmol/L）+照射組（6 Gy）。利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)洛鉑、射線以及洛鉑聯(lián)合射線對(duì)SiHa細(xì)

3、胞凋亡率的影響。
　　4.利用Western blotting檢測(cè)洛鉑對(duì)促凋亡蛋白Bax和抑凋亡蛋白Bcl-2在SiHa細(xì)胞中表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　1.MTT結(jié)果得出不同濃度的洛鉑處理SiHa細(xì)胞24、48和72 h的IC50值。
　　2.單擊多靶模型擬合單克隆形成實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得出空白組和洛鉑處理組的D0值分別為：3.588 Gy，2.226 Gy；空白組和洛鉑組Dq值分別為：0.792 Gy，0.053 G

4、y；洛鉑在SiHa細(xì)胞中的SER值為1.612。
　　3.流式細(xì)胞結(jié)果檢測(cè)空白組、洛鉑組、射線組和洛鉑聯(lián)合射線組的凋亡率分別為：4.44±2.07％，30.50±3.17%，43.08±5.93%和84.68±4.90%。
　　4.Western blotting檢測(cè)發(fā)現(xiàn)洛鉑組、射線組相對(duì)空白組促凋亡蛋白Bax表達(dá)顯著上調(diào)，抑凋亡蛋白Bcl-2顯著下調(diào)。洛鉑聯(lián)合射線組相對(duì)洛鉑組、射線組進(jìn)一步顯著上調(diào)Bax和下調(diào)Bcl-2的表

5、達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1.洛鉑能夠顯著的抑制宮頸癌SiHa細(xì)胞的增殖，隨著洛鉑藥物濃度增大和作用時(shí)間的延長(zhǎng)SiHa細(xì)胞的增殖率逐漸下降。
　　2.洛鉑能顯著增強(qiáng)宮頸癌SiHa細(xì)胞的射線敏感性，洛鉑處理后的SiHa細(xì)胞在射線下的存活分?jǐn)?shù)顯著低于未經(jīng)洛鉑處理的SiHa細(xì)胞。
　　3.洛鉑和放射照射分別能誘導(dǎo)宮頸癌SiHa細(xì)胞凋亡，并且洛鉑聯(lián)合射線能夠更加顯著促進(jìn)SiHa細(xì)胞凋亡。
　　4.洛鉑和放射照射作用于宮

6、頸癌SiHa細(xì)胞時(shí)，洛鉑和放射照射分別能夠提高促凋亡蛋白Bax的表達(dá)水平。洛鉑同步放射照射能提高促凋亡蛋白Bax的表達(dá)水平，且顯著高于單獨(dú)使用洛鉑或放射照射時(shí)。
　　5.洛鉑和放射照射作用于宮頸癌SiHa細(xì)胞時(shí)，洛鉑和放射照射分別能夠降低抑凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)水平。洛鉑同步放射照射能降低抑凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)水平，且顯著低單獨(dú)使用洛鉑或放射照射時(shí)。
　　6.洛鉑通過(guò)誘導(dǎo)增加促凋亡蛋白Bax的表達(dá)水平、抑制抑凋亡蛋白B