洛鉑誘導(dǎo)宮頸癌SiHa細胞凋亡與增強射線敏感性的研究.pdf

1、目的：
　　探討洛鉑抑制宮頸癌SiHa細胞系（cervical cancer cell line SiHa，SiHa）增殖、誘導(dǎo)細胞凋亡及增強細胞射線敏感性的作用及機制。
　　方法：
　　1.以0、1、2.5、5、10、20μmol/L濃度的洛鉑對SiHa細胞的作用24、48和72 h，利用四氮唑溴鹽比色試驗[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetra-zoli

2、umromide，MTT]檢測洛鉑對宮頸癌SiHa細胞增殖率的影響。
　　2.選取對數(shù)期生長的SiHa細胞接受洛鉑處理，依次接受0、2、4、6、8 Gy劑量的X射線照射48小時，利用單克隆形成實驗檢測洛鉑對SiHa細胞的射線敏感性影響。
　　3.依照處理方式的不同，依次分為空白組、洛鉑組（5μmol/L）、照射組（6 Gy）和洛鉑（5μmol/L）+照射組（6 Gy）。利用流式細胞術(shù)檢測洛鉑、射線以及洛鉑聯(lián)合射線對SiHa細

3、胞凋亡率的影響。
　　4.利用Western blotting檢測洛鉑對促凋亡蛋白Bax和抑凋亡蛋白Bcl-2在SiHa細胞中表達的影響。
　　結(jié)果：
　　1.MTT結(jié)果得出不同濃度的洛鉑處理SiHa細胞24、48和72 h的IC50值。
　　2.單擊多靶模型擬合單克隆形成實驗數(shù)據(jù)得出空白組和洛鉑處理組的D0值分別為：3.588 Gy，2.226 Gy；空白組和洛鉑組Dq值分別為：0.792 Gy，0.053 G

4、y；洛鉑在SiHa細胞中的SER值為1.612。
　　3.流式細胞結(jié)果檢測空白組、洛鉑組、射線組和洛鉑聯(lián)合射線組的凋亡率分別為：4.44±2.07％，30.50±3.17%，43.08±5.93%和84.68±4.90%。
　　4.Western blotting檢測發(fā)現(xiàn)洛鉑組、射線組相對空白組促凋亡蛋白Bax表達顯著上調(diào)，抑凋亡蛋白Bcl-2顯著下調(diào)。洛鉑聯(lián)合射線組相對洛鉑組、射線組進一步顯著上調(diào)Bax和下調(diào)Bcl-2的表

5、達。
　　結(jié)論：
　　1.洛鉑能夠顯著的抑制宮頸癌SiHa細胞的增殖，隨著洛鉑藥物濃度增大和作用時間的延長SiHa細胞的增殖率逐漸下降。
　　2.洛鉑能顯著增強宮頸癌SiHa細胞的射線敏感性，洛鉑處理后的SiHa細胞在射線下的存活分數(shù)顯著低于未經(jīng)洛鉑處理的SiHa細胞。
　　3.洛鉑和放射照射分別能誘導(dǎo)宮頸癌SiHa細胞凋亡，并且洛鉑聯(lián)合射線能夠更加顯著促進SiHa細胞凋亡。
　　4.洛鉑和放射照射作用于宮

6、頸癌SiHa細胞時，洛鉑和放射照射分別能夠提高促凋亡蛋白Bax的表達水平。洛鉑同步放射照射能提高促凋亡蛋白Bax的表達水平，且顯著高于單獨使用洛鉑或放射照射時。
　　5.洛鉑和放射照射作用于宮頸癌SiHa細胞時，洛鉑和放射照射分別能夠降低抑凋亡蛋白Bcl-2的表達水平。洛鉑同步放射照射能降低抑凋亡蛋白Bcl-2的表達水平，且顯著低單獨使用洛鉑或放射照射時。
　　6.洛鉑通過誘導(dǎo)增加促凋亡蛋白Bax的表達水平、抑制抑凋亡蛋白B