貓爪草有效部位和質(zhì)量控制的研究.pdf

1、中藥有效成分群辨識技術(shù)的研究是中醫(yī)藥研究的關(guān)鍵技術(shù)之一，本論文以臨床具有顯著療效但尚未進行系統(tǒng)研究的中藥材貓爪草為研究對象，對有效成分群的辨識方法及功效相關(guān)性進行了探索性研究。
　　 貓爪草Radix Ranunculi Ternati系毛茛科植物小毛茛Ranunculusternatus Thunb.的塊根，性甘、辛，微溫，具有清熱解毒、消腫散結(jié)的功效，臨床研究表明，貓爪草及其制劑對肺結(jié)核、淋巴結(jié)核和多種癌癥及淋巴瘤具有顯著療

2、效。現(xiàn)代藥理研究表明，貓爪草水提液不僅對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌等細菌有抑制作用，對S-180腫瘤株有顯著抑制作用。
　　 論文以化合物類別為試驗單位，以結(jié)核桿菌藥敏試驗和細胞毒試驗為藥效指標，篩選了有效部位，并應(yīng)用HPLC-MSn技術(shù)進行了譜效相關(guān)性和化合物辨識方法的探索性研究，進行了有效部位成分的分離和藥材質(zhì)量控制的研究。
　　 論文由文獻綜述和實驗兩部分組成。
　　 第一部分文獻綜述
　　 通過對報

3、道文獻資料的研究，對貓爪草的植物來源和商品用藥、資源分布、化學成分、質(zhì)量控制、藥理活性、功效主治及臨床應(yīng)用等方面的研究進行了較為系統(tǒng)的綜述。
　　 第二部分實驗部分
　　 一、有效部位的研究
　　 1.論文采用樹脂分離結(jié)合溶劑萃取的方法，以化合物類別為分離單位，提取分離了進行藥效試驗的物質(zhì)，并結(jié)合結(jié)核桿菌藥敏試驗和細胞毒試驗，進行了有效部位篩選試驗。
　　 2.應(yīng)用HPLC-MS技術(shù)首次對貓爪草有效部位進

4、行了譜效相關(guān)性研究；并應(yīng)用HPLC-MS/MS技術(shù)首次對有效部位的化學成分進行了辨識方法的探索；檢索了有效部位31個化學成分可能的化學式，并利用HPLC-MS/Ms的碎片離子的精確質(zhì)量數(shù)，推測了裂解方式，根據(jù)碎片信息，推測了19個可能的化合物，并用對照品驗證了丁二酸、辛二酸、壬二酸、癸二酸、咖啡酸等化學成分。
　　 3.首次通過對MS/MS失去碎片信息的分析，統(tǒng)計結(jié)果顯示有效部位中有多種有機酸存在，并可分為四類：一為芳香酸及其糖

5、苷，二為脂肪二元酸及其糖苷，三為羥基羧酸及其糖苷，四為雜環(huán)羧酸及其糖苷，其化合物辨識及驗證尚有待進一步探索。
　　 4.利用C18、硅膠、葡聚糖凝膠(LH-20)等層析分離技術(shù)及制備液相等手段對有效部位進行了分離，得化合物有：辛二酸，壬二酸、癸二酸、咖啡酸、香草酸、β-谷甾醇。其中辛二酸、壬二酸、癸二酸、咖啡酸、香草酸為本論文首次從貓爪草中分離得到。
　　 二、藥材質(zhì)量控制研究
　　 根據(jù)現(xiàn)行版《中國藥典》藥材質(zhì)

6、量標準的條款及目前該藥材的藥典標準，論文在鑒別、檢查和含量測定項進行了研究，并起草了藥材質(zhì)量標準修訂草案。研究內(nèi)容包括以下4個方面：
　　 1.鑒別項，研究制定了藥材的薄層鑒別方法；同時論文首次研究了應(yīng)用傅立葉變換紅外分光光度法對貓爪草藥材進行鑒別的方法，并探索了應(yīng)用紅外分光光度法進行藥材鑒別的參數(shù)設(shè)置。
　　 2.檢查項，對10批次藥材的水分、灰分、酸不溶性灰分、重金屬和浸出物含量進行了測定，為修訂質(zhì)量標準提供了參考依

7、據(jù)。
　　 3.含量測定項，結(jié)合藥效試驗，選擇了總游離酸、總黃酮為分析對象，進行了貓瓜草中總游離酸和總黃酮含量測定方法的研究。
　　 (1)首次建立了應(yīng)用電位返滴定法，直接測定藥材中總酸含量的方法，該方法操作簡便、結(jié)果可信，重復性好，方法學考察結(jié)果表明：符合含量測定的要求。
　　 (2)應(yīng)用差示分光光度法的原理，以堿性供試品溶液為參比，建立了中藥材貓爪草中總黃酮含量的測定方法。方法操作簡便，結(jié)果可信，重現(xiàn)性好，方