貓爪草多糖的研究.pdf

1、中藥貓爪草(RanunculusternatusThunb.)始載于《中草藥手冊》，系毛莨科植物小毛莨的塊根，具有解毒、化痰散結的功能，主治瘰疬、結核、咽炎等。貓爪草藥材主產于河南省信陽的駐馬店地區(qū)。多糖具有豐富的藥理活性，且無毒副作用，已廣泛應用于臨床及保健品市場。有關貓爪草中的化學成分已有不少報道，但對其中的多糖成分研究極少。 本論文包括綜述和研究報告兩部分內容。 第一部分：綜述 1.貓爪草研究概況

2、貓爪草的研究概況涉及貓爪草的化學成分的研究進展和貓爪草藥理的研究現狀。貓爪草中化學成分的內容涉及揮發(fā)油、內酯類、甾醇類成分、不飽和脂肪酸、無機元素和多糖等多種。貓爪草具有廣泛的藥理活性，其藥理研究涉及治療肺結核、頸淋巴結核、咽喉炎、淋巴癌、甲狀腺腫瘤及乳腺腫瘤等疾病。 2.多糖的研究進展 多糖的研究進展部分涉及多糖的生物活性研究現狀、多糖的研究方法、多糖的研究應用及其發(fā)展方向。 第二部分：研究報告 包括四

3、個研究報告：貓爪草多糖的提取及含量測定；貓爪草多糖的分離、純化及其理化性質的研究；貓爪草多糖的初步結構鑒定；貓爪草多糖的抗氧化活性研究。 首先，采用石油醚回流脫脂，熱水回流提取，經80％乙醇沉淀得水溶性多糖，多糖復溶后，透析除去小分子化合物后以80％乙醇沉淀，沉淀經95％乙醇，無水乙醇，丙酮，乙醚反復洗滌，干燥得貓爪草多糖半純品RTP(part-pureproductofpolysaccharideofRanunculuster

4、natusThunb.)。 使用o-T試劑法測定貓爪草中多糖的含量，UV法測定了蛋白含量。結果表明葡萄糖在0.2-1.0mg范圍內線性關系良好，回歸方程為Y=0.782x+0.00443(r=0.997，n=9)，牛血清蛋白在0.05-1.5mg·mL-1范圍內線性良好，其標準曲線為Y=0.2964x+0.027(r=0.998，n=6)。結果準確，重現性好，o-T試劑法測多糖含量，不僅可以測總糖的含量，還同時可以測定還原糖的含

5、量，較其他方法操作簡單，不必沉淀蛋白質，不受還原性物質干擾。而UV法測定蛋白含量簡單、靈敏、快速、不消耗樣品、低濃度鹽類不干擾測定。多糖與蛋白含量可以同時得出而互相不影響。 其次，利用氨基柱和DEAE-纖維素離子交換柱層析貓爪草多糖半純品(RTP)進行了分級純化。氨基柱水洗脫分離得到RTP-1，DEAE-纖維素柱依次用水、0.07、0.1、0.5mol·L-1NaCl和0.1mol·L-1NaOH梯度洗脫得二種級分，即水洗級分(

6、RTP-2)、0.07mol·L-1NaCl洗脫級分(RTP-3)。三種多糖級分分別經紫外光譜和高效凝膠滲透色譜進行純度鑒定，都是均一的多糖組分。 再次，采用高效凝膠滲透色譜測得三種貓爪草多糖級分的分子量分別為8805，9796，23154。 氣相色譜及氣質色譜分析可知，RTP-1主要由葡萄糖組成；RTP-2由D-木糖、葡萄糖組成；RTP-3由D-木糖、D-阿拉伯糖、葡萄糖組成，后兩種多糖為雜多糖。經IR和1HNMR分析

7、可知RTP-1、RTP-2、RTP-3均為α-糖苷鍵的吡喃環(huán)多糖化合物，13CNMR分析得到同樣的結果。 最后，抗氧化活性實驗主要研究了貓爪草多糖三種精制多糖RTP-1、RTP-2、RTP-3的體外抗氧化活性。(1)測定貓爪草多糖對小鼠肝勻漿、腎勻漿、心勻漿、腦勻漿中MDA生成的影響；(2)用分光光度法測定貓爪草多糖對H2O2誘導小鼠紅細胞溶血；(3)用分光光度法測定貓爪草多糖對小鼠肝線粒體中MDA生成的影響及Fe2+-VC誘導