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文檔簡介
1、[目的]
從小毛莨的塊根貓爪草中提取多糖,并研究貓爪草多糖(Polysaccharide ofRadix Ranunculi Ternati,RTP)對人肺癌A549細胞及人鼻咽癌CNE-2Z細胞的凋亡作用及其作用機制,以及貓爪草多糖的抗氧化活性,探討其在生物醫(yī)藥領域中應用的可能性,為進一步深入研究貓爪草多糖的抗腫瘤、抗氧化作用和臨床應用提供理論及實驗依據(jù)。
[方法]
1.應用MTT法研究RTP
2、體外對人肺癌A549細胞及人鼻咽癌CNE-2Z細胞增殖的影響。
2.應用Hoechst熒光染色法、碘化丙啶(Propidium iodide,PI)單染法分別檢測RTP對人肺癌A549細胞形態(tài)及細胞周期變化的影響。
3.通過RT-PCR方法檢測RTP對人肺癌A549細胞凋亡相關基因p53、Bcl-2、Bax基因mRNA表達水平的影響。
4.建立小鼠急性肝損傷模型,研究RTP對肝損傷小鼠血清ALT
3、、AST,臟器T-AOC、SOD活性及MDA含量和肝臟病理組織的影響。
5.建立小鼠D-半乳糖(D-galactose,D-gal)亞急性衰老模型,研究RTP對D-gal衰老小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)和脾細胞細胞周期,肝臟IL-2、TNF-α含量,臟器T-AOC、SOD活性及MDA含量,血清NO、NOS的影響。
[結果]
1.RTP在100μg/ml~800μg/ml濃度范圍內對人肺癌A549細胞及人
4、鼻咽癌CNE-2Z細胞均有不同程度的增殖抑制作用,其中對人肺癌A549細胞的增殖抑制較明顯,400μg/ml的RTP作用A549細胞72h的抑制率達66.57%。
2.RTP各劑量組100μg/ml~800μg/ml濃度范圍內作用于人肺癌A549細胞48h,能夠不同程度的誘導A549細胞凋亡,對細胞周期的影響表現(xiàn)為G0/G1期阻滯。
3.RTP在100μg/ml~800pg,ml濃度范圍內作用于人肺癌A549
5、細胞48h,能夠增強A549細胞相關基因p53和Bax基因mRNA水平的表達,降低Bcl-2基因的mRNA的表達水平,在濃度為400μg/ml時,作用最強。
4.RTP各劑量組(100mg/ml~400mg/ml)均能降低CCl4所致小鼠急性肝損傷肝體指數(shù)及血清ALT、AST活性,提高肝組織、腎組織、心組織勻漿T-AOC能力、SOD活力,降低MDA含量,同時不同程度減輕肝組織損傷的程度??赡芘c其抗氧化作用有關。
6、 5.RTP各劑量組(100mg/ml~400mg/ml)可提高肝組織、腎組織、心組織勻漿T-AOC能力、SOD活力,降低其MDA含量,對血清中NO、NOS含量沒影響,可提高D-gal衰老模型小鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù),使衰老模型小鼠脾細胞細胞周期向S期和G2/M期發(fā)生轉換,促進小鼠體內細胞因子IL-2和TNF-α的分泌。
[結論]
1.貓爪草多糖可能通過直接抑制A549細胞和CNE-2Z細胞增殖,阻滯A549細
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