腦血管狹窄患者外周血中樹(shù)突狀細(xì)胞數(shù)量變化的研究.pdf

1、研究背景:
　　 目前基礎(chǔ)和臨床的大量研究資料都證實(shí)炎癥反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)的發(fā)生、發(fā)展及由其導(dǎo)致的臨床事件的發(fā)生過(guò)程中扮演著決定性的角色[1]。DCs作為激活T淋巴細(xì)胞最主要的抗原提呈細(xì)胞，擁有著決定T淋巴細(xì)胞活化、凋亡及聚集等的重要功能[2]。DC和另外一種擁有抗原提呈功能的細(xì)胞——巨噬細(xì)胞都起源于骨髓造血干細(xì)胞[3]。DC存在于人體的許多器官和組織中，雖然這些DC都具有抗原呈遞功能，但

2、在具體作用方式方面存在明顯差異[4]。根據(jù)DC表面表達(dá)的分子標(biāo)記物可將其分為不同亞型[5]。雖然巨噬細(xì)胞也有抗原提呈功能，但更多扮演著吞噬侵入人體的外來(lái)物質(zhì)的“清道夫”，其抗原提呈功能與DC相比要弱的多[6]。與巨噬細(xì)胞不同，DC可以感受到人體內(nèi)環(huán)境的微小變化，是專職的抗原提呈細(xì)胞，擁有強(qiáng)大的激活幼稚T淋巴細(xì)胞的功能[7]。
　　 1967年，Mosier[8]發(fā)現(xiàn)在抗原和T/B淋巴細(xì)胞之間需要一種“輔助細(xì)胞”來(lái)特異性激活T/B

3、淋巴細(xì)胞，并將這種細(xì)胞稱為“信息傳遞者”?，F(xiàn)已知道，DC、巨噬細(xì)胞和部分B淋巴細(xì)胞均可起到這種“信息傳遞者”的作用，而DC是將抗原物質(zhì)傳遞給T淋巴細(xì)胞的最主要的抗原提呈細(xì)胞，被稱為“專職抗原提呈細(xì)胞”。概括起來(lái)，DC的抗原提呈功能就是先在人體外周捕獲侵入人體的抗原物質(zhì)，繼而遷徙到淋巴器官，將經(jīng)過(guò)處理的抗原物質(zhì)以抗原肽—MHC分子復(fù)合物的形式提呈給幼稚T淋巴細(xì)胞，從而激活T淋巴細(xì)胞，使其分化為對(duì)DC所提呈抗原物質(zhì)具有特異活性的成熟T淋巴細(xì)

4、胞。在這一過(guò)程中，DC也從抗原捕獲樣式轉(zhuǎn)換成T淋巴細(xì)胞的激活樣式，并在T淋巴細(xì)胞帶的周?chē)ň酉聛?lái)，繼續(xù)起著提呈抗原物質(zhì)和釋放協(xié)同刺激信號(hào)的作用，使T淋巴細(xì)胞達(dá)到最佳的活化狀態(tài)[9]。
　　 從19世紀(jì)就開(kāi)始了對(duì)免疫炎癥機(jī)制在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成過(guò)程中地位的激烈爭(zhēng)論。19世紀(jì)中葉德國(guó)病理學(xué)家Virchow堅(jiān)稱免疫炎癥機(jī)制在AS的形成過(guò)程中起著首要的決定性作用，但在當(dāng)時(shí)其觀點(diǎn)并未得到其他病理學(xué)家的認(rèn)可[10]。隨著免疫組織化學(xué)染色等

5、現(xiàn)代研究方法的進(jìn)展，T淋巴細(xì)胞等免疫炎癥細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中逐漸被發(fā)現(xiàn)。在小鼠模型中采用定向敲除編碼協(xié)同刺激信號(hào)和促炎癥反應(yīng)細(xì)胞因子的基因后，AS的發(fā)生率顯著下降;同樣，采用轉(zhuǎn)基因方法增加免疫反應(yīng)強(qiáng)度則可加速AS。因此，AS是一種慢性免疫炎癥疾病的觀點(diǎn)已得到越來(lái)越多的認(rèn)可[11]。血液中高濃度的膽固醇被認(rèn)為是啟動(dòng)這一免疫炎癥反應(yīng)的首要因素[12]。膽固醇在血液中主要是由低密度脂蛋白(Low-densitylipoprotein，LD

6、L)運(yùn)輸，這種運(yùn)輸形式主要是由酯化的膽固醇和三酰甘油外周包裹著磷脂、游離膽固醇和載脂蛋白B100(apolipoproteinB100，ApoB100)外殼構(gòu)成[13]。ApoB100與細(xì)胞外蛋白聚糖相結(jié)合可使該復(fù)合物運(yùn)輸形式通過(guò)離子通道，從而造成LDL在血管內(nèi)膜沉積。隨后，LDL可以被內(nèi)膜中的髓過(guò)氧化物酶、脂氧合酶以及內(nèi)膜中的其他氧化物質(zhì)氧化，形成氧化型LDL(oxidized-LDL，oxLDL)，而DC可以捕獲oxLDL然后將其遞

7、呈給T淋巴細(xì)胞，從而參與AS斑塊的發(fā)生和發(fā)展。實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，在載脂蛋白E基因敲除的小鼠模型中注入負(fù)載oxLDL的DC可導(dǎo)致AS的發(fā)生[14]。在小鼠中，膽固醇可觸發(fā)血管內(nèi)膜下DC對(duì)脂質(zhì)的攝取，從而引起最初的泡沫細(xì)胞和脂質(zhì)條紋的形成[15，16]，而活化的T淋巴細(xì)胞可促使巨噬細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞吞噬脂質(zhì)，形成更多的泡沫細(xì)胞并加速動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成[17]。
　　 研究表明，冠心病患者外周血DC的數(shù)量和功能均出現(xiàn)顯著異常[18]，C

8、D11c+mDC數(shù)量顯著減少，而pDC數(shù)量無(wú)顯著變化，mDC/pDC≥4對(duì)于區(qū)分急性冠脈綜合征和穩(wěn)定性心絞痛具有重要意義[19]。另外，冠心病患者血漿FMS樣絡(luò)氨酸激酶3配體(FMS-liketyrosinekinase3ligand，F(xiàn)lt3L)水平顯著降低，并與DC數(shù)量存在顯著相關(guān)性，而粒細(xì)胞（—）巨細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor，GM-CSF)水平無(wú)顯

9、著變化。作為對(duì)脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)的反應(yīng)，mDC可上調(diào)CD83和CD86表達(dá)，但CC趨化因子7受體(CCchemokinereceptortype7，CCR-7)表達(dá)和IL-12分泌無(wú)變化;相反，患者低表達(dá)CD83和CCR-7，咪喹莫特(imiquimod)過(guò)夜孵育CD83表達(dá)和INF-α分泌仍無(wú)顯著上調(diào)。這些研究結(jié)果表明，冠心病患者外周血mDC功能正常，而pDC功能下降。在腦血管AS病變的發(fā)生和發(fā)展過(guò)

10、程中，DC同樣發(fā)揮著重要的作用。相關(guān)研究證實(shí)，頸動(dòng)脈壁存在DC，不穩(wěn)定斑塊中的DC數(shù)量是穩(wěn)定斑塊的10倍，而且DC數(shù)量與頸動(dòng)脈AS導(dǎo)致的卒中風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)[20]。不過(guò)與冠狀動(dòng)脈等其他部位的動(dòng)脈相比，腦血管（特別是顱內(nèi)血管）的解剖學(xué)結(jié)構(gòu)存在其特殊性。與顱外血管相比，顱內(nèi)血管的內(nèi)彈力層和外膜結(jié)構(gòu)均不發(fā)達(dá)。目前，有關(guān)DC在腦血管AS病變過(guò)程中發(fā)揮怎樣作用的研究并不充足，因此DC及其各個(gè)亞群在腦血管AS病變過(guò)程中的作用尚需進(jìn)一步研究。
　

11、　 目的:
　　 如果免疫炎癥反應(yīng)的確在AS的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用，那么作為人體最主要的抗原提呈細(xì)胞，DC的數(shù)量和功能在外周血中也應(yīng)發(fā)生一定的變化，也就是說(shuō)在由AS導(dǎo)致的腦血管狹窄患者的外周血中DC的數(shù)量和功能必將發(fā)生相應(yīng)的變化，并且腦血管狹窄程度越重這種變化也將越顯著性。闡明DC在由AS導(dǎo)致的腦血管狹窄患者的外周血中數(shù)量的變化規(guī)律，可從側(cè)面驗(yàn)證免疫炎癥反應(yīng)在AS的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中的作用，并與冠心病患者外周血中DC的變

12、化規(guī)律相互驗(yàn)證，為建立針對(duì)DC防治AS的可能策略提供理論依據(jù)。
　　 研究方法及分組:
　　 因此我們選取2009年11月至2010年2月、2010年8月至2010年12月間在南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院病人63例作為研究對(duì)象，嚴(yán)格控制入組標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)過(guò)篩選，認(rèn)為導(dǎo)致腦血管狹窄的原因?yàn)锳S。入選患者均行DSA檢查，觀察血管包括:頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈和椎動(dòng)脈的顱外段、鎖骨下動(dòng)脈的椎動(dòng)脈開(kāi)口以近端、大腦中動(dòng)脈M1段、椎動(dòng)脈顱內(nèi)

13、段、基底動(dòng)脈、大腦后動(dòng)脈P1段及大腦前動(dòng)脈A1段。腦血管狹窄程度測(cè)量方法按照NASCET方法進(jìn)行測(cè)量。對(duì)各觀察動(dòng)脈分別進(jìn)行評(píng)定，多血管存在狹窄者根據(jù)狹窄程度最重的血管進(jìn)行分組。根據(jù)DSA檢查結(jié)果將患者分為4組:DSA檢查腦血管未見(jiàn)狹窄者作為正常對(duì)照組，DSA顯示腦血管直徑狹窄程度＜70％的患者作為輕中度狹窄組，DSA顯示腦血管狹窄程度≥70％者作為重度狹窄組，腦血管支架植入術(shù)后患者作為支架術(shù)后組。研究對(duì)象在珠江醫(yī)院介入中心進(jìn)行腦血管造影

14、檢查，術(shù)后由不知情的專門(mén)從事腦血管造影檢查及分析的人員依據(jù)測(cè)量結(jié)果對(duì)腦血管狹窄程度進(jìn)行評(píng)估，于腦血管造影術(shù)前空腹抽取外周動(dòng)脈血4ml（EDTA管，肝素1mg:5ml抗凝）。并記錄入組病人的性別、年齡、身高、體重、血壓、吸煙、飲酒、糖尿病、總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇等檢驗(yàn)指標(biāo)。對(duì)獲取標(biāo)本用流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血DCs亞型的比例。統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果:
　　 外周

15、血中骨髓樣樹(shù)突狀細(xì)胞(myeloiddendriticcells，mDCs)的比例在各組間比較存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.0001)，類漿樣樹(shù)突狀細(xì)胞(plasmacytoiddendriticcells，pDCs)的比例在各組間比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.065)。mDCs在各組間比較結(jié)果:正常對(duì)照組與輕中度狹窄組比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.275)，正常對(duì)照組與重度狹窄組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.040)，正常對(duì)照組與支架術(shù)后組比較沒(méi)有

16、統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.473)，輕中度狹窄組與重度狹窄組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.0001)，輕中度狹窄組與支架術(shù)后組比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=1.000)，重度狹窄組與支架術(shù)后組比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.297)。因此在本實(shí)驗(yàn)中mDCs的比例在由AS導(dǎo)致的不同腦血管狹窄程度患者外周血中存在重新分布的現(xiàn)象;pDCs的比例沒(méi)有顯著性變化;支架術(shù)后病人外周血中mDCs及pDCs的比例均沒(méi)有顯著性變化。
　　 結(jié)論:
　　 這一