創(chuàng)傷膿毒癥小鼠腸道和外周血樹突狀細胞變化的實驗研究.pdf

1、目的：
　　了解膿毒癥機體免疫功能紊亂的發(fā)生和發(fā)展，評估膿毒癥（sepsis）過程中樹突細胞變化的規(guī)律，深入闡明膿毒癥早期樹突狀細胞移位改變的重要作用，為下一步治療實驗提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　本實驗在前期研究的基礎上，選取健康清潔級BALB/c小鼠共50只，適應性喂養(yǎng)3天后，將小鼠隨機均分為實驗組和正常對照組。實驗組利用輸液BD針建立改良升結腸支架置入腹膜炎（colon ascendens stent peri

2、tonitis，CASP）膿毒癥小鼠動物模型，以小腸為標本，運用乙二胺四乙酸和膠原酶消化小腸組織，制得小鼠腸道粘膜固有層和腸集合淋巴結(Peyer’s Patches Peyer結)的單細胞懸液，在用CD11c抗體標記后，進行流式分析儀分析，檢測腸道樹突狀細胞與外周血樹突細胞變化，分析亞型CD86和MHC II的表達變化情況作為比對。此外，還檢測IL-10、TNF-a在各個時間點的改變。
　　結果：
　　1.實驗組小鼠外周血

3、TNF-a和IL-10均迅速升高，TNF-a高峰的出現(xiàn)早于IL-10，在改良升結腸支架置入腹膜炎膿毒癥小鼠模型建立24后的前12小時，尤其前6小時TNF-a上升明顯。IL-10水平也很快開始上升，并且持續(xù)的時間長于TNF-a，直到72小時后，IL-10的水平仍然較高。正常對照組小鼠外周血清中TNF-a和IL-10兩種炎癥因子的水平均低于ELISA試劑盒最小可測范圍。
　　2.模型建立后，實驗組小鼠腸粘膜固有層和腸集合淋巴結區(qū)（PP

4、結）樹突狀細胞比例均高于對照組。外周血的樹突狀細胞變化正好相反。外周血中的樹突狀細胞比例在24小時后明顯上升超過正常組小鼠。
　　3.模型建立后，實驗組小鼠腸道樹突狀細胞的CD86和MHC-ll分子明顯低于對照組。12小時和24小時其表達明顯增強，高于對照組小鼠。
　　4.實驗組小鼠腸道CD4-CD8+樹突狀細胞數(shù)量在模型建立后90分鐘后增多明顯，3小時后腸道固有層和腸集合淋巴結（PP結）CD4-CD8+樹突狀細胞數(shù)量分別為

5、對照組的36倍和5倍。CD4-CD8-出現(xiàn)的時間很晚，數(shù)量增多，其增加幅度較CD4-CD8+減小2-3倍。對照組小鼠腸道腸道樹突狀細胞亞型CD4、CD8的數(shù)量無變化。
　　結論：
　　在改良升結腸支架置入腹膜炎膿毒癥小鼠模型的早期，機體處于嚴重的炎癥狀態(tài)時腸道樹突狀細胞數(shù)量的激增以及外周血中樹突狀細胞數(shù)量的顯著下降，是二者發(fā)生了遷移的過程。在膿毒癥后期樹突狀細胞大量丟失、TNF-a水平下降則預示機體免疫細胞的耗竭,免疫功能低