染錳大鼠生精細(xì)胞凋亡機(jī)理的研究.pdf

1、目的：研究染錳大鼠睪丸精子數(shù)量，生精細(xì)胞凋亡、caspase—3mRNA、caspase—3及支持細(xì)胞vimentin表達(dá)的影響，探討染錳大鼠生精細(xì)胞凋亡的機(jī)理。 方法：雄性SD大鼠(體重120±10g)48只隨機(jī)分為6組：空白對(duì)照組，15mg/kg和30mg/kg MnCl2組。8只/組。15mg/kg MnCl2組和30mg/kg MnCl2分別染錳(MnCl2·4H2O)4w和6w，空白對(duì)照組給予等容NS，給錳及生理鹽水途

2、徑均為腹腔注射，5d/w，1次/d，大鼠分別于第4w末和第6w末處死，取睪丸和附睪作以下檢測(cè)：1.檢測(cè)精子數(shù)量；2.TUNEL法檢測(cè)睪丸生精細(xì)胞凋亡指數(shù)；3.原位雜交法檢測(cè)生精細(xì)胞caspase—3mRNA表達(dá)；4.免疫組化(SABC法)法檢測(cè)生精細(xì)胞caspase—3及支持細(xì)胞vimentin表達(dá)。 結(jié)果：1.錳對(duì)大鼠精子數(shù)量的影響：與空白對(duì)照組比較，各染錳組精子數(shù)量均顯著降低(P<0.01)。染錳劑量相同，染錳6w組與染錳4

3、w組比較，精子數(shù)量均顯著降低(P<0.01)。各組大鼠精子數(shù)量和AI呈負(fù)相關(guān)(r=-0.700，P<0.01)。精子數(shù)量和生精細(xì)胞caspase—3mRNA陽(yáng)性細(xì)胞率呈負(fù)相關(guān)(r=-0.892，P<0.01)。精子數(shù)量和生精細(xì)胞caspase—3陽(yáng)性細(xì)胞率呈負(fù)相關(guān)(r=-0.870，P<0.01)。精子數(shù)量和支持細(xì)胞vimentin陽(yáng)性細(xì)胞率呈正相關(guān)(r=0.895，P<0.01)。2.錳對(duì)大鼠生精細(xì)胞AI的影響：與空白對(duì)照組比較，各染

4、錳組AI均升高(P<0.05)。染錳劑量相同，染錳6w組與染錳4w組比較，AI均顯著升高(P<0.01)。染錳時(shí)間相同，30mg/kg MnCl2組與15mg/kg MnCl2組比較，AI均顯著升高(P<0.01)。各組大鼠生精細(xì)胞AI和caspase—3mRNA陽(yáng)性細(xì)胞率呈正相關(guān)(r=0.842，P<0.01)。各組大鼠生精細(xì)胞AI和caspase—3陽(yáng)性細(xì)胞率呈正相關(guān)(r=0.855，P<0.01)。各組大鼠生精細(xì)胞AI和支持細(xì)胞v

5、imentin陽(yáng)性細(xì)胞率呈負(fù)相關(guān)(r=-0.859，P<0.01)。3.錳對(duì)大鼠生精細(xì)胞caspase—3mRNA表達(dá)的影響：與空白對(duì)照組比較，各染錳組caspase—3mRNA陽(yáng)性細(xì)胞率均顯著升高(P<0.01)。染錳劑量相同，染錳6w組與染錳4w組比較，caspase—3mRNA陽(yáng)性細(xì)胞率均顯著升高(P<0.01)。染錳時(shí)間相同，30mg/kg MnCl2組與15mg/kg MnCl2組比較，caspase—3mRNA陽(yáng)性細(xì)胞率均顯

6、著升高(P<0.01)。各組大鼠caspase—3mRNA陽(yáng)性細(xì)胞率和caspase—3陽(yáng)性細(xì)胞率呈正相關(guān)(r=0.976，P<0.01)。各組大鼠生精細(xì)胞caspase—3mRNA陽(yáng)性細(xì)胞率和支持細(xì)胞vimentin陽(yáng)性細(xì)胞率呈負(fù)相關(guān)(r=-0.975，P<0.01)。4.錳對(duì)大鼠生精細(xì)胞caspase—3表達(dá)的影響：與空白對(duì)照組比較，各染錳組caspase—3陽(yáng)性細(xì)胞率均顯著升高(P<0.01)。染錳劑量相同，染錳6w組與染錳4w組

7、比較，caspase—3陽(yáng)性細(xì)胞率均顯著升高(P<0.01)。染錳時(shí)間相同，30mg/kg MnCl2組與15mg/kg MnCl2組比較，caspase—3陽(yáng)性細(xì)胞率均顯著升高(P<0.01)。各組大鼠生精細(xì)胞caspase—3陽(yáng)性細(xì)胞率和支持細(xì)胞vimentin陽(yáng)性細(xì)胞率呈負(fù)相關(guān)(r=-0.959，P<0.01)5.錳對(duì)大鼠睪丸支持細(xì)胞vimentin表達(dá)的影響：與空白對(duì)照組比較，各染錳組vimentin陽(yáng)性細(xì)胞率均顯著降低(P<0

8、.01)。染錳劑量相同，染錳6w組與染錳4w組比較，vimentin陽(yáng)性細(xì)胞率均顯著降低(P<0.01)。染錳時(shí)間相同，30mg/kg MnCl2組與15mg/kg MnCl2組比較，vimentin陽(yáng)性細(xì)胞率均顯著降低(P<0.01)。 結(jié)論：1.染錳15mg/kg4w即可誘發(fā)大鼠睪丸精子數(shù)量減少，兩者存在一定的時(shí)間.效應(yīng)關(guān)系。2.染錳15mg/kg4w即可誘導(dǎo)大鼠生精細(xì)胞凋亡，且生精細(xì)胞AI隨染錳時(shí)間的延長(zhǎng)和劑量的增加而增加

9、，存在一定的時(shí)間.效應(yīng)關(guān)系和劑量—效應(yīng)關(guān)系。3.染錳15mg/kg4w即可誘發(fā)大鼠生精細(xì)胞caspase—3mRNA及caspase—3表達(dá)，并且caspase—3mRNA及caspase—3的表達(dá)隨染錳時(shí)間和劑量的增加而增加，二者均存在一定的時(shí)間.效應(yīng)關(guān)系和劑量—效應(yīng)關(guān)系。4.染錳15mg/kg4w即可抑制大鼠睪丸支持細(xì)胞vimentin表達(dá)，vimentin表達(dá)隨染錳時(shí)間和劑量的增加而降低，二者存在一定的時(shí)間—效應(yīng)關(guān)系和劑量—效應(yīng)關(guān)