馬鈴薯抗晚疫病基因的等位基因發(fā)掘與轉(zhuǎn)化.pdf

1、學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明I I I I t l l l l I I II I H I l l l l l l lI I I lY 2 6 6 3 5 5 6本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。研究生簽名．剞辨 帆渺年7 月) ／日學(xué)位論文

2、版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位} 侖文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)學(xué)?？梢詫W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。( 保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)研究生簽名：子懈新簽字：玲歹布。，匕 } ，1 x時間：Ⅺ- 年’7 月≯日時間：矽，p 年7 月) 日青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文

3、摘要摘要馬鈴薯( S o l a n a u m t u b e r o s u m ．L ) 是世界第四大糧食作物，在世界食物安全中具有十分重要的作用。由致病疫霉菌( P h y t o p h t h o r ai n f e s t a n s ) 引起的晚疫病是馬鈴薯第一大病害，危害嚴重，難以防治。研究發(fā)現(xiàn)，四倍體馬鈴薯基因型M a R l l 對馬鈴薯晚疫病菌具有小種專化抗性，其抗病基因來源于六倍體馬鈴薯野生種＆d e m i

4、 s s u m ?？雇硪卟』騌 l l 位于馬鈴薯第X I 號染色體末端的船位點上，通過對已克隆R 3 位點的多個抗病基因( 如R 3 a 和R 3 b ) 的分析發(fā)現(xiàn)，R 3 位點上的抗病基因均具有共同的分子結(jié)構(gòu)( C C - N B S ．L R R ) 。因此，本研究旨在利用比較基因組學(xué)和抗病基因類似物法，發(fā)掘x I號染色體短臂末端抗晚疫病主效位點( M a j o r l a t e b l i g h t r e s i

5、s t a n c ec o m p l e x ，M L B ) 上的抗晚疫病基因或其類似物，并進行基因轉(zhuǎn)化驗證功能。主要研究結(jié)果有：( 1 ) 以含有抗晚疫病基因R l l 的M a R l 1 為材料，根據(jù)R 3 位點上抗病基因保守結(jié)構(gòu)域L R R 和N B S 設(shè)計引物，以M a R l l 的基因組D N A 為模板進行P C R 擴增，獲得了具有完整開放閱讀框的序列，利用生物信息學(xué)軟件對所得序列進行同源性比較和系統(tǒng)進化分析，

6、篩選得到6 個候選抗病基因類似物：A 2 、B 2 、B 3 、D 2 、F 3 、F 4 。( 2 ) 以p B I N P L U S 為骨架載體，構(gòu)建了6 個候選抗病基因類似物的植物表達載體p B I N P L U S —A 2 、p B I N P L U S —B 2 、p B I N P L U S —B 3 、p B I N P L U S —D 2 、p B I N P L U S - F 3 、p B I N P L

7、 U S ．F 4 ，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入感病品種四倍體馬鈴薯D e s i r e e 中，分別獲得了具有K a n 抗性的再生苗3 、2 、0 、4 、5 、3 株，并對部分轉(zhuǎn)基因植株進行了P C R 檢測，結(jié)果表明抗病基因類似物A 2 、D 2 、F 3 已導(dǎo)入D e s i r e e 中。其它植株正在檢測中，本實驗室后期將對轉(zhuǎn)基因植株接種晚疫病菌，進行抗病性鑒定以驗證候選抗病基因的功能。關(guān)鍵詞：馬鈴薯；晚疫病；抗病基因類似物；