高通量SSR標(biāo)記技術(shù)在小麥品種檢測(cè)中的應(yīng)用研究.pdf

1、本研究通過對(duì)PCR熱循環(huán)條件、特征峰值識(shí)別、等位變異賦值以及多重電泳體系構(gòu)建等進(jìn)行探索，以檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定、快速為原則，建立基于SSR熒光標(biāo)記的小麥品種高通量檢測(cè)技術(shù)，并應(yīng)用于2014年區(qū)域試驗(yàn)品種的特異性、一致性、穩(wěn)定性和真實(shí)性鑒定，以及2009-2013年河北省區(qū)域試驗(yàn)品種的DNA指紋圖譜構(gòu)建和遺傳差異分析。研究結(jié)果如下:
　　1、對(duì)PCR反應(yīng)的熱循環(huán)參數(shù)進(jìn)行摸索，減少了PCR產(chǎn)物非特異性擴(kuò)增。分析毛細(xì)管電泳峰形的特征，對(duì)特

2、征峰值和非特征峰值進(jìn)行識(shí)別，確保讀取數(shù)據(jù)的一致性和準(zhǔn)確性。利用參照樣品，將42對(duì)標(biāo)記各個(gè)等位變異的參照品種進(jìn)行賦值，同時(shí)確定了每對(duì)SSR熒光標(biāo)記的具體峰值片段范圍，為多重電泳構(gòu)建立奠定基礎(chǔ)。
　　2、將不同熒光標(biāo)記或峰值片段范圍不同的相同熒光標(biāo)記進(jìn)行分組，根據(jù)品種鑒定需要，構(gòu)建6-8重電泳組合，同時(shí)對(duì)不同熒光的PCR產(chǎn)物的混合比例及電泳體系體系進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，毛細(xì)管電泳方法的檢測(cè)效率、準(zhǔn)確性、靈敏度均高于垂直板凝膠電泳方法，并

3、將兩種電泳方法的檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行有效轉(zhuǎn)換和分析，確保前期小麥DNA指紋數(shù)據(jù)庫的持續(xù)應(yīng)用。
　　3、構(gòu)建了179個(gè)參試品種的DNA指紋圖譜，對(duì)不同組別品種進(jìn)行遺傳多樣性分析表明，北部麥區(qū)遺傳多樣性最豐富，黃淮南片和河南省區(qū)域試驗(yàn)品種最低。其中16個(gè)品種一致性較差，4個(gè)品種不具備真實(shí)性。
　　4、采用42個(gè)SSR標(biāo)記構(gòu)建2009-2013年70份河北省區(qū)域試驗(yàn)小麥品種的DNA指紋圖譜，并進(jìn)行遺傳差異分析。結(jié)果表明，42個(gè)SSR引物在