高通量SSR標記技術在小麥品種檢測中的應用研究.pdf

1、本研究通過對PCR熱循環(huán)條件、特征峰值識別、等位變異賦值以及多重電泳體系構(gòu)建等進行探索，以檢測結(jié)果準確、穩(wěn)定、快速為原則，建立基于SSR熒光標記的小麥品種高通量檢測技術，并應用于2014年區(qū)域試驗品種的特異性、一致性、穩(wěn)定性和真實性鑒定，以及2009-2013年河北省區(qū)域試驗品種的DNA指紋圖譜構(gòu)建和遺傳差異分析。研究結(jié)果如下:
　　1、對PCR反應的熱循環(huán)參數(shù)進行摸索，減少了PCR產(chǎn)物非特異性擴增。分析毛細管電泳峰形的特征，對特

2、征峰值和非特征峰值進行識別，確保讀取數(shù)據(jù)的一致性和準確性。利用參照樣品，將42對標記各個等位變異的參照品種進行賦值，同時確定了每對SSR熒光標記的具體峰值片段范圍，為多重電泳構(gòu)建立奠定基礎。
　　2、將不同熒光標記或峰值片段范圍不同的相同熒光標記進行分組，根據(jù)品種鑒定需要，構(gòu)建6-8重電泳組合，同時對不同熒光的PCR產(chǎn)物的混合比例及電泳體系體系進行優(yōu)化。結(jié)果表明，毛細管電泳方法的檢測效率、準確性、靈敏度均高于垂直板凝膠電泳方法，并

3、將兩種電泳方法的檢測數(shù)據(jù)進行有效轉(zhuǎn)換和分析，確保前期小麥DNA指紋數(shù)據(jù)庫的持續(xù)應用。
　　3、構(gòu)建了179個參試品種的DNA指紋圖譜，對不同組別品種進行遺傳多樣性分析表明，北部麥區(qū)遺傳多樣性最豐富，黃淮南片和河南省區(qū)域試驗品種最低。其中16個品種一致性較差，4個品種不具備真實性。
　　4、采用42個SSR標記構(gòu)建2009-2013年70份河北省區(qū)域試驗小麥品種的DNA指紋圖譜，并進行遺傳差異分析。結(jié)果表明，42個SSR引物在