高糖誘導(dǎo)雞胚眼發(fā)育畸形及原花青素的干預(yù)作用研究.pdf

1、目的:
　　妊娠期糖尿病是圍產(chǎn)期常見并發(fā)癥之一，是指婦女在妊娠期間合并糖尿病癥狀。近年來妊娠期糖尿病的全球患病率正在逐年增長，越來越受到廣泛的關(guān)注。流行病學(xué)調(diào)查和動物實驗證明，妊娠期糖尿病可引起各種胚胎發(fā)育畸形，其中眼睛發(fā)育畸形十分嚴(yán)重。但是，其發(fā)生機理至今尚不清楚。目前，針對妊娠期糖尿病的治療，尚無特別好的措施。主要還是利用降糖藥物進行降糖治療，如胰島素等，都有一定的副作用。因此尋找有效的防治藥物顯得尤為重要。本研究在課題組前期

2、建立的高糖雞胚眼發(fā)育畸形的模型基礎(chǔ)上，進一步研究高糖環(huán)境造成雞胚眼睛發(fā)育畸形的機制，并利用該模型評價了原花青素的干預(yù)作用。本課題旨在揭示妊娠糖尿病造成胚胎眼睛發(fā)育畸形的損傷機制，并且為開發(fā)安全有效的孕期畸形發(fā)生的防治藥物，提高妊娠質(zhì)量及預(yù)防不良妊娠結(jié)果提供有益的科學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　根據(jù)前期試驗結(jié)果，建立高糖誘導(dǎo)雞胚眼睛發(fā)育畸形模型，根據(jù)眼睛發(fā)育相關(guān)調(diào)控基因，用熒光定量PCR的方法篩選出損傷最嚴(yán)重的基因。構(gòu)建Pax6質(zhì)

3、粒轉(zhuǎn)染進入雞胚內(nèi)驗證，檢測雞胚死亡率、眼睛畸形率、眼睛中Pax6基因和蛋白表達水平、Otx2和Six3基因表達水平。研究原花青素的保護作用:將受精雞蛋隨機分為正常對照組(0.72％生理鹽水)、模型組(Glucose0.2mmol/egg)、原花青素低、高劑量組(1 nmol/egg和10 nmol/egg)、依達拉奉組(0.1 nmol/egg)，共五組進行實驗。原花青素和依達拉奉分別于第0天注射入氣室，葡萄糖于第1天注射入氣室（原花青

4、素組和依達拉奉組均給予葡萄糖）。記錄胚胎的死亡率、眼睛畸形發(fā)生率、體重、體節(jié)數(shù)。體視顯微鏡下觀察各組胚胎形態(tài)。利用試劑盒測定胚胎眼睛中葡萄糖含量和氧化應(yīng)激的水平。用熒光定量PCR測定GLUT1基因和Pax6基因水平。用Western blotting測定Pax6蛋白水平。
　　結(jié)果:
　　給予高糖后，造成雞胚眼睛發(fā)育畸形。PCR結(jié)果顯示雞胚眼睛中Pax6基因受損最為嚴(yán)重。過表達Pax6后，雞胚的死亡率和眼睛畸形率都明顯下降，

5、同時Otx2基因和Six3基因表達水平也恢復(fù)了。給予原花青素后，在高糖環(huán)境下，雞胚死亡率及眼睛畸形率明顯降低，體重及體節(jié)數(shù)回升，生長趨于正常，呈劑量依賴關(guān)系。原花青素并未影響胚胎眼睛中葡萄糖的水平和葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白表達水平。和高糖組相比，原花青素干預(yù)下胚胎眼睛中Pax6基因和蛋白均回升。ROS和MDA水平降低，SOD和GSH-Px酶活性回升，氧化應(yīng)激程度減輕。
　　結(jié)論:
　　本研究證實Pax6在高糖誘導(dǎo)的雞胚眼睛發(fā)育畸形中的