TRPM7通道在出生后小鼠耳蝸發(fā)育不同時期的表達、定位和功能研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、TRPM7(transient receptor potential melastatin7)是一種對于Mg2+和Ca2+都具有高通透性的非選擇性陽離子通道。曾有報道TRPM7在發(fā)育的耳蝸中有表達。本文旨在研究①TRPM7在出生后小鼠耳蝸發(fā)育不同時期的細胞定位;②環(huán)境中的Mg2+對trpm7在耳蝸Corti器中表達水平的影響;③TRPM7在耳蝸毛細胞中的鎂離子轉運功能。
  我們的初步研究發(fā)現(xiàn),通過RT-PCR檢測出生后不同發(fā)育時

2、期(P0、P7、P15、P21)的小鼠耳蝸中trpm7的表達情況,觀察到trpm7表達在P0時最高(P<0.05),在隨后的發(fā)育過程中trpm7表達水平相對穩(wěn)定,Real-time PCR檢驗不同發(fā)育時期Corti器的結果與上述一致。我們通過免疫熒光觀察了不同發(fā)育時期小鼠耳蝸TRPM7蛋白的細胞定位,首次觀察到TRPM7在毛細胞(CHCs)、血管紋(SVs)和螺旋神經節(jié)(SGCs)三個部位隨著發(fā)育的表達水平的改變,提示TRPM7可能在耳

3、蝸發(fā)育過程中起著重要的作用。
  我們還發(fā)現(xiàn)改變培養(yǎng)環(huán)境中Mg2+濃度能夠影響trpm7在體外培養(yǎng)的Corti器中的表達水平。Real-time PCR的結果顯示,分別用含10mM和30mM Mg2+的培養(yǎng)基培養(yǎng)P0小鼠的耳蝸Corti器,trpm7的表達與對照組(1.2 mM)相比分別減少70.3%(n=4,P<0.01)和43.5%(n=4,P<0.01)。這提示,耳蝸Corti器的中trpm7的表達受環(huán)境中鎂離子濃度的調節(jié)。

4、
  我們應用鎂離子熒光探針Mag-indo-1來檢測急性分離P7小鼠耳蝸外毛細胞(COHCs)游離鎂。我們發(fā)現(xiàn),胞外鎂離子濃度的改變會影響COHCs胞內的游離Mg2+的變化。用0.2μM Mg2+孵育能夠使COHCs胞內Mg2+相對熒光強度與對照組相比無顯著差異,30 mM Mg2+孵育能夠使COHCs胞內Mg2+相對熒光強度增至對照組的363.6%(n=6,P<0.01)。當胞外Mg2+從0.2μM上升至30 mM時,對照組M

5、g2+相對熒光強度能夠增加至384.2%(n=19,P<0.01)。在上述實驗過程中加入500μM2-APB(TRPM7阻斷劑)后,胞內Mg2+相對熒光強度增加至247.1%,與對照組相比有顯著減少(n=19,P<0.01)。結果提示TRPM7參與了COHCs中Mg2+的內流。
  綜上所述,①TRPM7在不同發(fā)育時期的小鼠耳蝸中有廣泛的表達和特異的細胞定位。②TRPM7在耳蝸Corti器的表達受環(huán)境中鎂離子濃度的調節(jié)。③COHC

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