Ngn2和Math6在小鼠內(nèi)耳不同時(shí)期表達(dá)的初步研究.pdf

1、目的：研究ngn2（neurogenin2）和math6在不同時(shí)期小鼠內(nèi)耳的表達(dá)變化，并初步探討其對(duì)螺旋神經(jīng)元發(fā)育的作用。
　　方法：1.本實(shí)驗(yàn)選取不同時(shí)期BALB/c小鼠，以E13.5、E14.5、P1、成年為觀察時(shí)間點(diǎn)，將小鼠耳蝸固定后切片，行HE染色，識(shí)別不同時(shí)期的耳蝸結(jié)構(gòu)，以便后期的進(jìn)一步研究。
　　2.將上述不同時(shí)期的耳蝸切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，了解ngn2和math6蛋白在耳蝸中的表達(dá)情況。
　　3.以E

2、12.5、E13.5、E14.5、E17.5、P1、P7和成年為觀察時(shí)間點(diǎn)，應(yīng)用realtimeqPCR技術(shù)檢測(cè)ngn2、math6在耳蝸中mRNA的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：1.E13.5蝸管完成大約3/4轉(zhuǎn)，平衡聽覺神經(jīng)節(jié)已分化為前庭神經(jīng)節(jié)(VG)和螺旋神經(jīng)節(jié)(SG)，發(fā)育的螺旋神經(jīng)節(jié)尚無神經(jīng)纖維長出；E14.5耳蝸發(fā)育中的螺旋神經(jīng)節(jié)開始伸出神經(jīng)纖維，柱狀上皮少許部分開始分化；P1耳蝸已達(dá)到成熟長度，約1.75轉(zhuǎn)，發(fā)育的螺旋神經(jīng)節(jié)

3、和毛細(xì)胞形成纖維連接，底轉(zhuǎn)蓋膜開始形成；成年的耳蝸各形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰，內(nèi)外毛細(xì)胞、蓋膜等可清楚辨認(rèn)。
　　2．免疫組織化學(xué)結(jié)果提示，在E13.5、E14.5和P1，ngn2和math6在螺旋神經(jīng)節(jié)處有不同程度的陽性表達(dá)；在成年期，math6有弱表達(dá)，但ngn2幾乎不表達(dá)，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.RealtimeqPCR結(jié)果提示ngn2在E12.5d呈高表達(dá)，隨后在E13.5d表達(dá)量下調(diào)，直至成年呈低水平