CBFA1及礦化相關蛋白在出生后小鼠牙體牙周組織發(fā)育中表達的研究.pdf

1、核心結(jié)合因子(corebindingfactoral，Cbfa1)是成骨細胞分化的特異性轉(zhuǎn)錄因子，除在骨骼發(fā)育及骨的形成中起關鍵作用外，在牙胚發(fā)育中亦具有重要作用，是成骨細胞、成軟骨細胞和牙源性細胞株所必須的轉(zhuǎn)錄因子。Cbfa1可以調(diào)控眾多基因的轉(zhuǎn)錄，包括在牙胚發(fā)育中起重要作用的骨唾蛋白(Bonesialoprotein，BSP)、骨橋素(Osteopontin，OPN)、骨鈣素(Osteocalcin，OC)、堿性磷酸酶(alkali

2、nephosphatase，ALP)等多種礦化相關蛋白。研究發(fā)現(xiàn)Cbfa1在牙胚發(fā)育的早期階段高表達，參與牙冠的形成和成牙本質(zhì)細胞的分化。但其在牙胚發(fā)育后期，尤其是牙周組織發(fā)育中的研究較少。本研究采用生后BALB/c小鼠牙齒發(fā)育實驗模型，利用免疫組化技術(shù)對Cbfa1及礦化相關蛋白在出生后小鼠牙體牙周組織中的表達進行定位，為研究牙齒發(fā)育和牙周組織的再生提供相應的理論依據(jù)。 目的 (1)建立出生后BALB/c小鼠牙齒發(fā)育動物

3、模型。 (2)探討Cbfa1及礦化相關蛋白在出生后小鼠牙體牙周組織發(fā)育過程中的時空表達及意義。 方法 隔天取出生后第1～27天的BALB/c小鼠，拉頸處死，分離并解剖含下頜第一磨牙區(qū)下頜骨，新鮮配制4％多聚甲醛固定過夜。自出生后第7天的標本開始用甲酸-甲酸鈉復合脫鈣液脫鈣，脫鈣時間1～28天不等。常規(guī)石蠟切片，蘇木素-伊紅染色，確定小鼠牙齒發(fā)育情況。另外用免疫組化SABC法檢測牙齒發(fā)育過程中Cbfa1的表達和免疫

4、組化二步法檢測礦化相關蛋白的表達。 結(jié)果 (1)出生后小鼠牙齒發(fā)育：出生后第一天小鼠下頜第一磨牙牙胚處于鐘狀晚期；第5天時內(nèi)釉上皮和外釉上皮形成的上皮根鞘內(nèi)折，牙根開始發(fā)育；第11天時根部的牙囊開始分化為牙周組織，初步具有牙根形態(tài)；第17天的牙根發(fā)育約一半，牙周膜成纖維細胞排列具有方向性；第27天時牙周組織排列方向性明顯，根尖區(qū)有大量的細胞性牙骨質(zhì)，根尖孔縮窄，牙根的發(fā)育逐漸完成。 (2)Cbfa1在出生后小鼠牙

5、體牙周組織發(fā)育中的表達：牙齒發(fā)育早期，Cbfa1僅在前期牙本質(zhì)和牙槽骨的骨基質(zhì)中表達，隨著牙囊細胞的分化，Cbfa1開始在牙周膜細胞，牙髓細胞、成牙本質(zhì)細胞、成釉細胞中陽性表達，根部的牙髓細胞和成牙本質(zhì)細胞表達強于冠部，尤其以根尖區(qū)牙根延伸的部位為重。前期牙本質(zhì)和牙槽骨基質(zhì)中逐漸變?nèi)?。牙齒整個發(fā)育過程中，牙本質(zhì)一直為陰性表達，牙骨質(zhì)中亦未見明顯陽性表達。 (3)礦化相關蛋白在出生后小鼠牙體牙周組織發(fā)育中的表達：OPN和BSP在早

6、期的前期牙本質(zhì)和牙槽骨中表達，并逐漸變?nèi)?，隨后在牙骨質(zhì)和牙周膜細胞中表達，且牙骨質(zhì)中始終為強陽性，但OPN表達早于BSP。ALP和OC在牙乳頭細胞和隨后的牙髓細胞、成牙本質(zhì)細胞、牙周膜細胞中表達，但它們在牙骨質(zhì)中不表達。這四種礦化相關蛋白在牙本質(zhì)中都不表達，在牙槽骨中的表達都較弱，但是它們都在成釉細胞和牙周膜細胞中表達。 結(jié)論 (1)BALB/c小鼠下頜第一磨牙在出生后第5天牙周組織開始發(fā)育，27天基本發(fā)育完成。

7、 (2)Cbfa1在牙體牙周組織發(fā)育過程中的表達具有時空特異性。Cbfa1參與牙本質(zhì)的形成、礦化和成牙本質(zhì)細胞、牙髓細胞的發(fā)育及牙周組織的發(fā)育，這表明Cbfa1除在牙齒發(fā)育早期具有重要作用外，亦在牙齒發(fā)育后期對牙體牙周組織的發(fā)育起必不可少的階段特異性作用。 (3)OPN、BSP、OC和ALP這四種礦化相關蛋白在牙體牙周組織發(fā)育過程中的表達具有時空特異性。OPN和BSP主要在牙骨質(zhì)和牙周膜中表達，提示它們對牙骨質(zhì)的形成起重要作用。