腦脊液細(xì)胞學(xué)免疫化學(xué)染色與激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)對(duì)腦膜癌病的診斷價(jià)值.pdf

1、目的：流行病學(xué)調(diào)查表明，惡性腫瘤死亡率位居全世界死亡疾病之首，故腫瘤是威脅人類生命健康的日益嚴(yán)重的疾病。而作為惡性腫瘤的一種特殊類型——腦膜癌?。╩eningeal carcinomatosis），是中樞神經(jīng)系統(tǒng)轉(zhuǎn)移癌的一種特殊類型，是惡性腫瘤廣泛轉(zhuǎn)移浸潤(rùn)蛛網(wǎng)膜下腔，而中樞神經(jīng)系統(tǒng)實(shí)質(zhì)本身無肉眼或顯微鏡可見的浸潤(rùn)病灶的一類非獨(dú)立性病。在實(shí)體腫瘤患者中發(fā)生率約為5％，死亡率極高。它常發(fā)生于原發(fā)病灶出現(xiàn)癥狀之前，且臨床表現(xiàn)無特征性，患者早期

2、臨床表現(xiàn)往往僅有腦膜刺激征和顱內(nèi)壓增高，隨后可相繼出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，甚至出現(xiàn)全腦癥狀。其中以腦膜刺激征最常見，故極易與腦膜炎相混淆而誤診，又稱癌性腦膜炎。因其在顱內(nèi)不形成實(shí)體腫塊，所以影像學(xué)診斷困難，既往活體診斷率幾乎為零。上述原因致使很多患者在確診時(shí)往往已是疾病的晚期，失去了治療的機(jī)會(huì)，給家庭和社會(huì)帶來極大的危害。腦脊液細(xì)胞學(xué)的出現(xiàn)使腦膜癌病達(dá)到活體診斷水平，成為國(guó)內(nèi)外診斷腦膜癌病的首選方法，腦脊液細(xì)胞學(xué)MGG染色即我們通常意義上的細(xì)

3、胞學(xué)常規(guī)染色方法，但其僅依賴于細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，對(duì)于異型性不典型細(xì)胞易誤診漏診，因此本研究把腦脊液細(xì)胞學(xué)癌胚抗原（CEA）免疫細(xì)胞化學(xué)染色與激光掃描共聚焦顯微鏡（LSCM）檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用于腦膜癌病診斷中來，以使腦膜癌病的診斷提高到分子水平，減少漏診誤診。
　　 方法：河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科2003年2月——2008年7月入院既在我院確診患者，腦膜癌病組42例，均于入院后24～48小時(shí)內(nèi)行腰椎穿刺術(shù)留取腦脊液，根據(jù)標(biāo)本量多少，將

4、MC患者CSF標(biāo)本離心沉淀后分別進(jìn)行進(jìn)行邁格姬氏染色（42例）、CEA免疫細(xì)胞化學(xué)染色（29例）、免疫熒光雙標(biāo)記染色（17例），其中CEA免疫細(xì)胞化學(xué)染色與免疫熒光雙標(biāo)記染色分別設(shè)有對(duì)照組20例，與病例組同樣方法收集標(biāo)本染色。將邁格姬氏染色、CEA免疫細(xì)胞化學(xué)染色后的玻片至于光鏡下觀察，免疫熒光染色玻片置于激光共聚焦顯微鏡下觀察，并對(duì)其進(jìn)行定位、定性、定量分析及三維圖像的重建。比較三種方法的敏感性、特異性及其優(yōu)略性。
　　 結(jié)果

5、：42例患者均經(jīng)腦脊液細(xì)胞學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞，首次腦脊液細(xì)胞學(xué)檢查陽性率為85.71％（36/42），其中29例患者結(jié)合CEA免疫細(xì)胞化學(xué)染色，陽性率為79.31％（23/29），17例經(jīng)免疫熒光雙標(biāo)記染色，陽性率為76.47％（13/17），三者之間陽性率兩兩比較P>0.05。免疫熒光染色呈現(xiàn)胞核藍(lán)色、胞漿胞膜紅色者為腦膜癌病CEA陽性細(xì)胞；只有藍(lán)色胞核，胞漿胞膜未顯色者為腦膜癌病CEA陰性細(xì)胞或非腦膜癌病細(xì)胞；定量分析對(duì)照組細(xì)胞核D

6、NA熒光值范圍946.000-184.284，胞漿胞膜CEA熒光值范圍360.686-90.321；MC組CEA（+）者細(xì)胞核DNA相對(duì)含量范圍為2710.135-793.863，及CEA熒光相對(duì)含量范圍為2104.515-853.274，與對(duì)照組比較均有非常顯著性差異（P<0.01）；MC組CEA（-）者細(xì)胞核DNA相對(duì)含量與對(duì)照組比較有非常顯著性差異（P<0.01），CEA平均熒光值與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。

7、　　 結(jié)論：
　　 1、腦脊液細(xì)胞學(xué)MGG染色是目前診斷MC的主要基本手段。
　　 2、腦脊液細(xì)胞學(xué)免疫細(xì)胞化學(xué)染色為MC定性診斷提供了有力佐證。
　　 3、激光共聚焦顯微鏡與免疫熒光技術(shù)把MC的診斷提高到定性、定位與定量相結(jié)合的新水平，尤其定量分析顯示MC患者細(xì)胞核DNA平均熒光值較非MC患者細(xì)胞核DNA平均熒光值具有成倍性差異，對(duì)MC患者免疫細(xì)胞化學(xué)染色腫瘤標(biāo)記物陰性者具有診斷意義。
　　 4、三種