雙歧桿菌對潰瘍性結(jié)腸炎的保護(hù)作用及其免疫機(jī)制初步研究.pdf

1、目的： 1．建立DSS誘導(dǎo)的Babl/c小鼠UC模型以及雙歧桿菌防治模型，為下一步研究做準(zhǔn)備。 2．檢測IECs中TLR2、TLR4．NF-κBp65、IL-1和TNF-α的表達(dá)以對其在UC及雙歧桿菌防治UC中的作用加以研究。 3．研究 DCs在UC及雙歧桿菌防治UC中的作用。 方法： 將60只Babl/c小鼠隨即分為三組即正常對照組(N)、DSS誘導(dǎo)組(D)、雙歧桿菌灌腸組(B)。N組不施加作用

2、，D組生理鹽水灌腸14天，并從第8天開始再給以2％的DSS自由飲用；B腸組用雙歧桿菌灌腸14天，并從第8天開始再給以2％的DSS自由飲用。14天后處死小鼠做組織病理切片；制作冰凍切片和石臘切片采用免疫組織化學(xué)染色分別檢測腸道中DCs和NF-κBp65的表達(dá)；分離IECs提取 IECs中的總RNA與蛋白，用RT-PCR法檢測TLR2、TLR4的表達(dá)，用 westernblot檢測NF-κBp65的表達(dá)，并且用 Real time RT-P

3、CR法檢測IL-1和INF-α的表達(dá)。 結(jié)果： 1．D組小鼠從第13天開始出現(xiàn)大便隱血陽性，稀便，到第14天小鼠出現(xiàn)肉眼血便，稀便，而B組除兩例出現(xiàn)大便隱血外其余正常；且病理切片顯示D組小鼠腸道粘膜組織結(jié)構(gòu)紊亂，有潰瘍形成，B組和N組無潰瘍形成，成功建立了UC模型及雙歧桿菌防治模型。 2．RT-PCR檢測顯示：D組與B組IECs內(nèi)TLR2的表達(dá)要高于N組，且D組TLR2的表達(dá)要高于B組，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；D組T

4、LR4的表達(dá)要高于N組和B組，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而B組與N組之間無顯著性差異。 3．免疫組織化學(xué)染色顯示D組與B組NF-κBp65的表達(dá)要高于N組，且D組要高于B組，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；NF-κBp65的western blot檢測結(jié)果與免疫組織化學(xué)染色結(jié)果一致。 4．Real timePCR檢測顯示：D組TNF-α和IL-1的表達(dá)要高于N組和B組，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義而B組和N組之間無顯著性差異。 5．DCs免

5、疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示D組與B組腸粘膜均有大量的DCs出現(xiàn)，而N組腸粘膜幾乎檢測不到DCs。 結(jié)論： 1．在通常的情況下腸道菌群和宿主之間保持著一種動(dòng)態(tài)的平衡，當(dāng)腸道菌群和宿主之間的這種平衡被打破(腸道細(xì)菌增加尤其是革蘭陰性細(xì)菌的增加)時(shí)，腸道革蘭陰性菌可以誘導(dǎo) IECs上TLR4表達(dá)的增加，并通過與TLR4的結(jié)合引起 IECs內(nèi)NF-κB通路的持續(xù)激活，進(jìn)而增加前炎癥因子(TNF+α和IL-1)的表達(dá)，最終在腸道的炎癥