解析“未知”型癲癇的生物標志物hsA-miR-1275及其靶基因研究.pdf

1、未知型癲癇(unknown-causedepilepsy)又稱隱源性癲癇(cryptogenic epilepsy)，是指在臨床上表現(xiàn)為癥狀性癲癇(symptomatic epilepsy)，然而以目前的臨床診斷水平又無法查出明確病因。往往在特定的年齡段起病，無特殊的臨床和腦電圖特征。因此，分子機理與治療的研究不夠全面。microRNAs作為內源性非編碼RNA(non-coding RNA)家族的成員之一，參與調控基因的轉錄水平。miR

2、NA在不同組織和發(fā)育階段具有時空表達差異性，影響各種疾病的發(fā)生發(fā)展過程。目前，未見miRNA與未知型癲癇的相關研究報道。本文，我們首次應用miRNA芯片篩選了全血的miRNA生物標志物hsa-miR-1275。而且確定了部分靶基因MECP2，SV2A，GABA受體，離子通道相關基因等。這為臨床診斷和治療提供重要線索。
　　為此，本課題的主要工作和研究結果如下:(1)建立生物樣本庫。收集癲癇和正常對照人群的體液樣本，包括血液、腦脊液

3、，建立癲癇的生物樣本庫。(2)未知型癲癇生物標志的芯片數(shù)據(jù)初期篩選:通過microRNA生物芯片對未知型癲癇和正常對照組的血液中的microRNA進行芯片雜交，再通過芯片數(shù)據(jù)分析軟件分析表達差異明顯的microRNA(n=20，fold change value＞30)，其中有18個上調，2個下調，篩選出未知型癲癇的候選生物標志物。(3)對候選標志物hsa-miR-1275、miR-764的功能和靶基因分析:通過生物信息學數(shù)據(jù)庫預測他們

4、的神經(jīng)生物學功能和靶基因特點。對基因進行Gene Ontology和KEGG富集分析以了解這些差異基因的生物學功能和參與的信號通路。(4)芯片數(shù)據(jù)驗證。通過Taqman探針RT-PCR實驗對未知型癲癇的血清和腦脊液的microRNA，進行相對定量比較。發(fā)現(xiàn)hsa-miR-1275在血清中高表達(p＜0.001)，在腦脊液低表達(p＜0.001)。(5)hsa-miR-1275調控靶基因MECP2的轉錄和表達:MECP2的3'-UTR存在

5、多個被hsa-miR-1275靶向調控額位點，且具有較高的物種保守性。實時熒光定量PCR和蛋白質免疫印記實驗結果表明MECP的轉錄和表達都受到hsa-miR-1275的調控影響。(6)初步探討hsa-miR-1275可能參與的信號通路:hsa-miR-1275過表達可激活NF-κB轉錄水平。(7)hsa-miR-1275對細胞功能的影響:hsa-miR-1275異常表達影響神經(jīng)膠質瘤細胞U251的細胞周期，進而促進細胞凋亡。