miR-26a作為胃癌預后生物標志物初探.pdf

1、背景:胃癌(gastric cancer，GC)是目前世界上發(fā)病率和死亡率分居第五位和第三位的常見惡性腫瘤。近年來，胃癌的全球發(fā)病率和死亡率都呈下降趨勢，但胃癌仍是發(fā)展中國家癌癥相關死亡的主要原因。在世界范圍內(nèi)，胃癌的男性發(fā)病率是女性的兩倍，且發(fā)病率與死亡率都有顯著的地域差別。在我國，胃癌是排名第三的致死性腫瘤，僅次于肺癌和肝癌。早期胃癌并無明顯癥狀，臨床確診時多為中晚期，從而失去最佳治療時機。盡管胃癌的診斷手段和治療方案日漸先進，但是

2、胃癌患者的預后仍然不佳。
　　微小RNA（microRNA，miRNA）是在真核生物中發(fā)現(xiàn)的一類內(nèi)源性的具有調(diào)控功能的非編碼蛋白質(zhì)小RNA，參與腫瘤細胞的生物調(diào)控過程，在腫瘤的診斷和預后中扮演著重要的角色。大量研究報道m(xù)iRNAs與包括胃癌在內(nèi)的很多種惡性腫瘤的預后密切相關。選擇合適的miRNAs作為胃癌的預后生物標志物具有巨大的臨床價值。本實驗室前期通過TaqMan低密度芯片(TaqMan lowdensity array，TL

3、DA)篩選出四個在胃癌血漿中表達差異明顯的miRNAs（miR-148a、miR-142-3p、miR-26a和miR-195），本研究擬在胃癌患者的組織中檢測出特異性表達的miRNAs，并將其作為胃癌預后的生物學標志。
　　方法:本研究通過RT-PCR（實時定量聚合酶鏈式反應）實驗在一階段南通胃癌石蠟樣本中檢測miR-148a、miR-142-3p、miR-26a和miR-195的表達水平，篩選出與胃癌預后相關的miRNAs，在

4、宜興石蠟樣本中繼續(xù)驗證一階段研究結果。在Pubmed中搜索關于候選miRNAs、gastric cancer和survival或prognosis有關的文獻，運用STATA11.0等軟件進行Meta分析后，再確定進行下一步的進行功能研究的miRNA。在胃癌細胞株MGC803、BGC823、SGC7901、MKN28和正常細胞株GES-1檢測miRNAs本底表達，選擇表達最低的細胞株進行功能實驗探索。經(jīng)RT-PCR證實轉染成功后，通過CC

5、K-8（cell counting kit-8，細胞計數(shù)試劑盒）細胞增殖試驗分析細胞增殖能力的改變，運用平板克隆試驗檢測單個細胞的惡性程度，采用Transwell細胞遷移侵襲試驗檢驗細胞遷移和侵襲能力的變化，應用流式細胞儀檢測細胞周期凋亡的變化。
　　結果:在一階段南通387例石蠟樣本結果顯示，miR-26a和miR-148a的表達水平與預后顯著相關，P值分別為0.009和0.005; miR-142-3p和miR-195的表達水

6、平于預后無關，P值分別為0.320和0.119。因此在二階段宜興石蠟樣本中不在驗證miR-142-3p和miR-195。miR-26a和miR-148a的表達水平、浸潤深度、淋巴結轉移、TNM分期、分化程度與不良預后均有關系。多因素Cox回歸模型顯示miR-26a和miR-148a能改善胃癌的預后（miR-26a: HR=0.76，95％CI=0.61-0.94; miR-148a: HR=0.73，95％CI=0.58-0.91）;另

7、外，TNM分期和化療也與胃癌預后顯著相關，P值均＜0.05。
　　鑒于前期已有多篇有關miR-148a與胃癌研究報道，本研究主要側重于miR-26a與胃癌預后相關的生物學機制探討。在胃癌細胞株MGC803中miR-26a顯著低于正常細胞GES-1(P＜0.01)。在MGC803細胞中過表達miR-26a48h后，增殖能力有明顯下降(P＜0.001);克隆形成率下降了69％(P=0.004);癌細胞通過小室的遷移率下降了48％(P=

8、0.028);侵襲能力顯著下降(P=0.031)。流式細胞術顯示增加細胞內(nèi)miR-26a表達，細胞周期無明顯改變，但細胞凋亡率明顯增高（P=0.004）。
　　結論:癌組織中的miR-26a、miR-148a的表達水平可能與胃癌預后相關。腫瘤的TNM分期、浸潤深度、淋巴結轉移等均能影響胃癌生存時間。過表達miR-26a可抑制胃癌的發(fā)生和發(fā)展。我們的研究提示miR-26a的表達水平可以用來預測胃癌患者手術預后的情況，是潛在的預后預測