松口蘑菌種的分離、純化、鑒定及原生質(zhì)體制備的研究.pdf

1、東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文松口蘑菌種的分離、純化、鑒定及原生質(zhì)體制備的研究姓名：孟雪申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：森林保護學(xué)指導(dǎo)教師：鄒莉;王志英20061201A b s t r a c tT h em e t h o do fc o m b i n i n gm o r p h o l o g i c a lc h a r a c t e ra n dm o l e c u l a rb i o l o g i c a lt e c h n

2、 i q u e sw a s d e v e l o p e d f o r i d e n t i f y i n g m y e e l i a l i s o l a t e s o f T r i c h o l o m a m a t s u t a k e w i t h t h e i rb a s i d i o c a r p s i n t h i s p a p e r ．T h em e t h o do fi

3、 s o l a t e d ．c u l t i v a t e d a n dp r e p a r e d p r o t o p l a s t o fT r i c h o l o m am a t s u t a k e w a s a l s os t u d i e di nt h i s p a p e r ．i n t h es t u d y , f i v ek i n d so ft i s s u e so

4、ff r e s hT r i c h o l o m am a t s u t a k ew e r ei s o l a t e d ，w h i c hw e r et h el a m e l l a e ，t h ep i l e u ，t h eb o u n d a r yb e t w e e np i l e na n d s t i p e ，t h em i d d l ep a r ta n dt h eb e

5、l o w p a r to ft h es t i p e ，t h e nc u l t u r e d s e p a r a t e l yo nP D A , P D A + V B l + V B 3 ，P D A + J e w ’s - e a r’e x t r a c t + w h e a tb r a n ，B T ，B T + V B t ，B Ma n dB M + V B 3 m e d i u m sf

6、o rg e r m i n a t i o n ．弧er e s u l ts h o w e dt h a to n l yt h e t i s s u ef r o ml a m e l l a e c a l lb o u r g c o nm y c e l i u ma f t e r2 5 d ．T h em y c e l i ab o u r g e o np e r c e n tW a st h eh i g h

7、 e s tw h e nb e i n gc u l t u r e do nP D A + J e w ’S —e a re x t r a c t + w h e a tb r a nm e d i u m ．T h em o r p h o l o g i c a lc h a r a c t e rw a s c o m p a r e db yo b s e r v i n gt h em y c e l i a o fT

8、r i c h o l o m am a t s u t a k e a n d t h ei s o l a t e dw i t hm i c r o s c o p e ．a(chǎn) n di t w a s p r i m a r yc o n f L r m e dt h a tt h ei s o l a t e di st h em y c e l i a o f T r i c h o l o m a m a t s u t a

9、 k e ；t h e n t h er e l a t i o n s b e t w e e nT r i c h o l o m a m a t s u t a k ea n d t h ei s o l a t e dw e r ea n a l y z e db yt h e R A P D t e c h n o l o g y ．T h eR A P D - P C R c o n d i t i o n s w e r

10、e o p t i m i z e d ，a n d1 7o f 4 0a r b i t r a r yd e c a m e rn u c l c o t i d ep r i m e r sw e r e a l s os c r e e n e d w i t hg o o di m p l i c a t i o na n d r e p e t i t i o n ．T h e P e R r e a c t i o na

11、d o p t e d t h e1 7k i n d s o f r a n d o m p r i m e r s ．T h ec l e a ra n d s t e a d yD N A f i n g e r p r i n t sw e r eo b t a i n e d ．T h eS 1 M Q U A L p r o c e s s o f t h eN T S Y S —P C s o f t w a r eW a

12、 su s e dt oc o u n tD N A f i n g e r p r i n t ss i m i l a r i t y ．T h er e s u l ts h o w e dt h a tt h eD N A f i n g e r p r i n t ss i m i l a r i t yc o e f f i c i e n tb e t w e e n b a s i d i o c a r p s a n

13、 d t h e i r m y c c l i aw e r e 1 ．0 0b y c o n s t r u c t i n gt h eU P G M A t r e ec h a n ．S o i t w a s c o n c l u d e d t h ei s o l a t e dm y c e l i a a r et h e m y c e l i a o fT r i c h o l o m a m a t s

14、u t a k e ．B ym e n s u r a t i n g t h er a t e - o fg r o w t h ，t h e b e t t e r m e d i u m ，p Ha n dt e m p e r a t u r e f o r t h em y c e l i a o fT r i c h o l o m am a t s u t a k ew e r ef i l t e r e d ．T h

15、er e s u l t ss h o w e dt h a tP D A m e d i u mi s t h eb e s t f o r c u l t u r i n gm y c e l i a ，t h e s e c o n d i s P D A + V B 3m e d i u m ，K H 2 P 0 4 + M g S 0 4 + m a l t o s e+ 9 1 u c o s e + V B l + a m

16、 m o n i a t a r t a r i ca c i dm e d i u m a n dB T m e d i u m ，t h el a s t i s P D A + J e w ’S —e a re x t r a c t + w h e a tb r a nm e d i u m ；T h e b e s tp Hf o rc u l t u r i n gT r i c h o l o m am a t s u t

17、 a k e i s5 ．5 - 6 ．0a n dt h eb e s tt e m p e r a t u r e i s2 3 ℃．B ym e n s u r a t i n g t h eo u t p u to f m y c e l i ao f T r i c h o l o m a m a t s u t a k e ．t h e b e s tl i q u i dc u l t u r em e d i u mf

18、o rc u l t u r i n gT r i c h o l o m am a t s u t a k ew a ss c r e e n e do u t ．T h er e s u l ts h o w e d t h a tt h em y c e l i ao nP D A m e d i u m w i t h o u ta g a r m e d i u mg r o w t h eb e s t ．T h ed a

19、t aw e r ea n a l y z e db yt h eM u l t i p l eC o m p a r i s o n s ．T h eb e s tc o m p o u n d o ff i q u i d —m e d i u mi s p o t a t o4 0 0 9 ／L a n d d e x t r o s e 3 0 ∥LL y w a l l z y m ea n ds n a i l e n z