2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、本文對蛹蟲草無性型蛹草擬青霉的產(chǎn)孢培養(yǎng)基、酶解條件、原生質(zhì)體制備等方面進行了研究,同時以溫漢遜氏酵母Hansenula wingei YB-4662-VIA和粟酒裂殖酵母Schizosaccharomyces pombe972h-染色體DNA作為標準指示樣品,利用等強度均一電場(Contour-clamped Homogeneous Electric Field,CHEF)凝膠電泳技術(shù)比較了蛹草擬青霉菌株的電泳核型。
   培養(yǎng)

2、基對菌株產(chǎn)孢量的影響實驗中發(fā)現(xiàn),除了菌株RCEF0848外基本上都以SMAY培養(yǎng)基最好,產(chǎn)孢量最大,菌株RCEF0848的產(chǎn)孢量以在察氏培養(yǎng)基上培養(yǎng)后的產(chǎn)孢量最大。
   酶解過程中存在著各種影響因素,包括酶的選擇、酶反應(yīng)溫度、酶反應(yīng)時間等??傮w上混合酶液的效果好于單一酶類的作用效果。用相同濃度的蝸牛酶、纖維素酶和溶壁酶混合配成的酶解液酶解效果最佳;酶反應(yīng)溫度在30~35℃溫度范圍內(nèi),原生質(zhì)體的產(chǎn)量相差不多,高于或低于這個范圍時

3、原生質(zhì)體產(chǎn)量都會下降,但通過后期實驗結(jié)果同時考慮到原生質(zhì)體的質(zhì)量,選擇31℃為最適反應(yīng)溫度,在120r/min的條件下震蕩處理2.48h即可獲得大量的原生質(zhì)體,為后續(xù)實驗打下好的基礎(chǔ)。
   原生質(zhì)體產(chǎn)生過程中觀察到一系列現(xiàn)象:原生質(zhì)體在釋放過程中體積變化較大,大小各不一致,前期產(chǎn)生的原生質(zhì)體直徑較小,后期產(chǎn)生的原生質(zhì)體直徑較大。原生質(zhì)體在釋放過程中主要有頂端、側(cè)位、及原位三種釋放方式,釋放后期基本以原位釋放為主。另外,還發(fā)現(xiàn)一

4、種現(xiàn)象,即當兩個原生質(zhì)體靠的很近時,兩者可以發(fā)生自然融合現(xiàn)象。
   經(jīng)過對電泳條件的多次篩選,認為最理想的電泳條件是分兩個階段進行,以利于大小條帶的分離。兩個階段分別從電泳時間、電泳液的溫度、電泳緩沖液的種類、瓊脂糖濃度、電壓、脈沖轉(zhuǎn)換的時間、轉(zhuǎn)換的角度等方面考慮。第一階段:時間為48h,溫度14℃,電泳緩沖液1×TAE,瓊脂糖濃度0.8%,電壓2v/cm,脈沖時間20~30min,轉(zhuǎn)換角度106°:第二階段:16h,14℃,

5、1×TAE,0.8%,3v/cm,500s,106°。
   以標準指示(marker)樣品估算蛹草擬青霉的染色體大小和核型大小,結(jié)果為:蛹草擬青霉RCEF0096最小的染色體估算其大小為2.04Mb,最大的染色體估算大小為5.76Mb,整個染色體條帶在31.0Mb以上;菌株RCEF4544染色體DNA最大及最小分別為5.69、2.04Mb,整個染色體條帶在28.2Mb以上;菌株RCEF0848染色體DNA大小在2.0~5.7M

6、b,整個染色體條帶在28.0Mb以上。故推算蛹草擬青霉基因組大小在28.0~31.0Mb。
   核型分析表明蛹草擬青霉種內(nèi)各菌株間核型存在一定的差異,呈現(xiàn)明顯的多態(tài)性,與其生存環(huán)境、寄主的多樣性、以及培養(yǎng)過程中易退化等等因素有著微妙的關(guān)聯(lián)。但各個菌株間最大染色體DNA大小和最小染色體DNA大小的估算值接近,同時條帶的個數(shù)也是相同的。說明這種差異從某個角度來說是不那么顯著的,這也與文獻中指出的真菌電泳核型差異是種間大于種內(nèi)、屬間

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