高溫酵母的分離鑒定及原生質體融合構建耐高溫高產酒精酵母.pdf

1、從來源不同的基質中共分離得到227株耐高溫酵母菌,經初篩、復篩和酒精發(fā)酵試驗,獲得一株耐高溫且具有一定產酒精能力的酵母菌株h-1,其在42℃下72小時發(fā)酵,酒精產率為5.5％.研究了h-1的形態(tài)和生理生化特性,結果表明:h-1菌株產生1-4個土星行子囊孢子,該菌株發(fā)酵葡萄糖、蔗糖,弱發(fā)酵棉籽糖,不發(fā)酵麥芽糖、半乳糖,乳糖;同化棉籽糖、纖維二糖、木糖、檸檬酸、琥珀酸、蔗糖,不同化肌醇、核糖、赤蘚糖醇、鼠李糖、核糖醇、甘露醇、可溶性淀粉、阿

2、拉伯糖、海藻糖、半乳糖、麥芽糖、乳糖;不能同化硝酸鹽;可在無維生素培養(yǎng)基上生長;37℃下可生長.根據《The Yeast》(第三版),鑒定h-1菌株屬于的土星漢遜酵母(Hansenula Saturnus).選擇化學藥物和紫外滅活單親原生質體為遺傳標記,測定了放線菌酮、三唑酮、多菌靈、灰酶特殺、決菌、霜霉狂殺對h-1和釀酒酵母SP-48的抑制作用,結果表明只有0.01%的三唑酮可以抑制SP-48,而不抑制h-1,選擇0.01%的三唑酮作

3、為藥物標記.測定了紫外照射劑量和h-1原生質體致死率的關系,當紫外燈為20瓦,照射距離為30cm,照射時間為2分鐘時,h-1原生質體的致死率為100%.因此,以0.01%的三唑酮和紫外照射h-1原生質體2分鐘為遺傳標記.采用PEG法將h-1酵母與不耐高溫的高產酒精酵母SP-48進行原生質體融合,獲得既耐高溫酒精產率又較高的融合子LZ-3,LZ-3 72小時發(fā)酵,酒精產率為7.5%.融合子LZ-3遺傳性狀穩(wěn)定,傳代20次后,融合子LZ-3

4、的酒精產率和初代相比沒有明顯變化.確定了融合子LZ-3生長和發(fā)酵的最適溫度和pH值;研究了溫度、pH值和接種量對生長和發(fā)酵曲線的影響;測定了融合子LZ-3的耐酸堿;耐酒精;耐鹽;耐糖和耐發(fā)酵副產物特性.結果表明:融合子LZ-3的最適生長溫度為36℃,最適生長pH為5;最適發(fā)酵溫度為34℃,最適發(fā)酵pH為5;溫度和接種量對生長和發(fā)酵曲線的影響顯著,pH對生長和發(fā)酵曲線的影響不顯著;耐酒精能力為20%(v/v);耐鹽能力為11%;可在50%