綿羊胃腸道游離氨基酸與小肽分布及其轉(zhuǎn)運載體相關(guān)基因表達的研究.pdf

1、本研究旨在探討綿羊胃腸道不同區(qū)段食糜中游離氨基酸(FAA)與小肽(PAA)的數(shù)量分布及其小肽轉(zhuǎn)運載體PEPT1(SLC15A1)、堿性氨基酸轉(zhuǎn)運載體CAT1(SLC7A1)、酸性氨基酸轉(zhuǎn)運載體EAAT3(SLC1A3)、中性氨基酸轉(zhuǎn)運載體y+LAT2(SLC7A6)和ASCT2(SLC1A5)、氨基肽酶APN、二肽酶DPEP2mRNA的表達規(guī)律，為研究綿羊胃腸道蛋白質(zhì)消化吸收規(guī)律和氨基酸跨膜轉(zhuǎn)運機制提供基礎(chǔ)資料。
　　選取體重相近

2、的18月齡健康小尾寒羊6只（空懷母羊），屠宰后收集瘤胃、十二指腸、空腸、回腸和盲腸的食糜及對應(yīng)腸道組織。采用液質(zhì)聯(lián)用法對腸道不同區(qū)段食糜上清液中的小肽和游離氨基酸濃度進行測定，分析綿羊胃腸道內(nèi)游離氨基酸和小肽的數(shù)量分布;根據(jù)GenBank公布的綿羊PEPT1、CAT1、EAAT3、y+LAT2、ASCT2、APN和DPEP2基因的cDNA序列設(shè)計引物，采用雙標準曲線法通過實時熒光定量PCR(Real-time Quantitative

3、PCR，RT-QPCR)技術(shù)對上述基因在綿羊胃腸道不同區(qū)段mRNA表達規(guī)律進行研究;用Western blot方法檢測CAT1和PEPT1兩種蛋白在綿羊十二指腸、空腸和回腸組織的表達水平。主要研究結(jié)果如下:
　　1.除半胱氨酸外，綿羊胃腸道不同區(qū)段的食糜中小肽濃度從高到低的分布依次為十二指腸、空腸、回腸、盲腸和瘤胃，部位間差異顯著(P＜0.05)。不同區(qū)段食糜中小肽的組成比例不同，肽結(jié)合賴氨酸在空腸中含量較高，而在回腸中含量較低;

4、肽結(jié)合谷氨酸在所有部位含量都較高;肽結(jié)合半胱氨酸在所有部位含量都較低。
　　綿羊胃腸道不同區(qū)段的食糜中大部分游離氨基酸濃度從高到低的分布依次為空腸、十二指腸、回腸、瘤胃和盲腸，前二者顯著高于其它部位(P＜0.05);部分中性氨基酸，包括精氨酸、酪氨酸、色氨酸、蛋氨酸、甘氨酸和苯丙氨酸在十二指腸的濃度高于空腸，其中酪氨酸和色氨酸差異顯著(P＜0.05)。不同區(qū)段食糜游離氨基酸的組成比例不同，天冬氨酸在回腸中含量較低而在盲腸中含量較高

5、;精氨酸在瘤胃中含量最低而在十二指腸中含量較高;谷氨酸和賴氨酸在幾乎所有的腸段內(nèi)含量都較高;半胱氨酸在盲腸中含量較其他腸段中高。
　　食糜中小肽占總氨基酸（TAA）的比例在空腸顯著低于其它部位(P＜0.05)，在盲腸占比最高，顯著高于其他部位(P＜0.05)。
　　2.CAT1mRNA在空腸表達量最高，但胃腸道不同區(qū)段間差異不顯著(P＞0.05);EAAT3、y+LAT2、PEPT1、APN mRNA均在回腸表達量最高，其次

6、是空腸和十二指腸，在瘤胃和盲腸的表達量最低;ASCT2和DPEP2mRNA在十二指腸和盲腸表達量較高，在回腸表達量較低。
　　3.CAT1蛋白的表達量按十二指腸、空腸和回腸的順序依次降低，三者之間差異不顯著(P＞0.05);PEPT1蛋白的表達量按回腸、十二指腸和空腸的順序依次降低，三者之間差異不顯著(P＞0.05)。
　　以上結(jié)果表明:胃腸道不同區(qū)段食糜中游離氨基酸和小肽的數(shù)量和組成比例不同;小肽的主要釋放部位是十二指腸，