燃煤型地方性氟中毒病區(qū)人群外周血白細(xì)胞髓過氧化物酶和過氧化氫酶mRNA表達(dá)水平及基因多態(tài)性關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、目的：測(cè)燃煤型地方性氟中毒病區(qū)人群髓過氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO）和過氧化氫酶（Catalase，CAT）mRNA在外周血白細(xì)胞中的表達(dá)，分析MPO和CAT基因多態(tài)性變化，探討其與燃煤型氟中毒發(fā)病機(jī)制的相關(guān)性，以及了解改灶和健康教育等綜合干預(yù)措施后對(duì)病區(qū)人群的健康影響。
　　方法：選擇貴州省畢節(jié)市燃煤型地方性氟中毒重病區(qū)人群，分干預(yù)組（已采取改灶和健康教育等綜合干預(yù)措施）和非干預(yù)組（尚未采取有效干預(yù)措施），在

2、貴州省長(zhǎng)順縣非地方性氟中毒病區(qū)選擇健康人群作為對(duì)照組。各組選擇成人150例，空腹抽取靜脈血，分離白細(xì)胞，并分別提取白細(xì)胞中RNA和DNA。采用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR方法檢測(cè)氟中毒非干預(yù)組、氟中毒干預(yù)組、及對(duì)照組人群外周血白細(xì)胞中MPO、CAT mRNA的表達(dá)；對(duì)MPO基因啟動(dòng)子區(qū)-463G/A位點(diǎn)進(jìn)行功能學(xué)研究，PCR方法擴(kuò)增出 MPO基因啟動(dòng)子區(qū)，克隆至螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因載體pGL3-Basic上，構(gòu)建重組質(zhì)粒pGL3-G、pGL3

3、-A，并分別與海腎熒光素酶報(bào)告基因載體 pRL-TK瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至人肝癌細(xì)胞株（HepG2），利用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)分析MPO基因啟動(dòng)子區(qū)-463G/A位點(diǎn)點(diǎn)突變對(duì)基因轉(zhuǎn)錄活性的影響；采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）方法檢測(cè)CAT基因啟動(dòng)子區(qū)-262C/T、-21A/T位點(diǎn)的基因型。結(jié)果用SPSS13.0軟件統(tǒng)計(jì)各組人群外周血白細(xì)胞中MPO和CAT mRNA的區(qū)別和分布頻率，分析其與疾病的關(guān)聯(lián)性。
　　

4、結(jié)果：氟中毒非干預(yù)組人群外周血白細(xì)胞中MPO mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組和干預(yù)組升高（P＜0.05），而氟中毒干預(yù)組MPO mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組無顯著差異（P>0.05）；氟中毒非干預(yù)組和干預(yù)組CAT mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組顯著降低（P＜0.01），氟中毒非干預(yù)組與干預(yù)組之間CAT mRNA表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。成功構(gòu)建MPO基因啟動(dòng)子重組質(zhì)粒pGL3-G和pGL3-A，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HepG2后，經(jīng)雙熒光素酶報(bào)告基因

5、檢測(cè)分析，MPO基因-463G/A位點(diǎn)發(fā)生遺傳變異后，重組質(zhì)粒 pGL3-G比 pGL3-A使報(bào)告基因熒光素酶表達(dá)增加了19％；氟中毒非干預(yù)組、干預(yù)組及對(duì)照組CAT-262C/T、CAT-21A/T多態(tài)的基因型頻率分布符合Hardy-weinberg遺傳平衡定律；三組之間，CAT-262C/T，CAT-21A/T基因型及等位基因頻率在各組間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：氟中毒非干預(yù)組MPO mRNA表達(dá)水平升高、CA

6、T mRNA表達(dá)水平降低，表明地方性氟中毒病區(qū)人群氧化應(yīng)激水平較正常對(duì)照人群升高；經(jīng)過采取有效的綜合干預(yù)措施后，MPO mRNA水平較非干預(yù)組明顯降低，表明綜合干預(yù)措施在防治地方性氟中毒方面有一定作用。
　　MPO-463位點(diǎn)G等位基因使MPO轉(zhuǎn)錄活性增高，提示MPO-463位點(diǎn)G→A突變可能使轉(zhuǎn)錄因子SP1失去結(jié)合位點(diǎn)；結(jié)合我們前期發(fā)現(xiàn)氟中毒組MPO酶活力及MPO-463G等位基因頻率均高于對(duì)照組的研究結(jié)果，提示MPO基因A等位