鱖魚的髓性過氧化物酶、NADPH氧化酶基因的分子特征及原核表達.pdf

1、分類號UDC密編級學位論文指導老師姓名： 塞鲞握． 塾攫．直昌太堂生金型堂堂瞳．申請學位級別： 亟± 一- _ 專業(yè)名稱： 動塑堂論文提交日期： 星Q Q 魚生墨旦 答辯日期： 窒Q Q 魚生魚旦 旦學位授予單位和日期： 直昌太堂 星Q Q 魚生月 旦答辯委員會主席：評閱人：2 0 0 6 年月 日蘭一型世齜 型世：曩l摘要C h a r a c t e r i z a t i o n s a n d P r o k a r

2、y o t i c e x p r e s s i o no f m y e l o p e r o x i d a s ea n dN A D P H o x i d a s e g e n eo fm a n d a r i n f i s h $ ．c h u a t s i )A b s t r a c tT h e m a n d a r i n f i s h ( S i n i p e r c a c h u a t s

3、i ) i sa ni m p o r t a n ts p e c i e sf o ra q u a c u l t u r ei n d u s t r yi nC h i n a ．T h eu n d e r s t a n d i n g i t si m m u n e s y s t e mi se s s e n t i a lf o r a q u a c u l t u r e ．T h ep r e s e n

4、ts t u d yi st Oc l o n eN A D P H o x i d a s ea n d m y e l o p e r o x i d a s e t h a tr e l a t e dt or e s p i r a t i o nb u r s ta n dt oe x p r e s s p a r to fh e a v y c h a i no fm y e l o p e r o x i d a s e

5、 w i t hP r o k a r y o t i ce x p r e s s i o n ．T h e M P O a n d t h ef i v es u b u n i t o fN A D P H o x i d a s ec D N A s f u l l s e q u e n c e o fm a n d a r i n f i s hh a v eb e e nc l o n e d u s i n gR A C

6、 E —P C R a n dP C R ．T h e f u l lc D N A o f M P O i s3 3 4 5n u c l e o t i d e s ．O p e nr e a d i n g f r a m e ( O R F ) i s2 2 9 2 n u c l e o t i d e sw h i c h e n c o d e a7 6 3 a m i n o a c i dp e p t i d e ．

7、C o m p a r i s o no fM P O a m i n o a c i ds e q u e n c ew i t hp a r to ft h ek n o w n M P O p r o t e i ns e q u e n c ef r o mo t h e rm a m m a ld e m o n s t r a t e d al o w e r l e v e l o fs i m i l a r i t y

8、 ，b u tt h e y h a v ea p p r o x i m a t e l y m o l e c u l a rw e i g h t ，M P Oo ft h e m a n d a r i n f i s h h a ss i m i l a r i t y h e m a c h r o m eg r o u p ，ac o n s e r v e db a n d i n gc a l c i u ms i t

9、 e ，s i xi n t r a —m o l e c u l ed i s u l f i d eb r i d g e sa n d s i xN - g l y c o s y l a t i o ns i t e s a sm a m m a l ．T h e s e r e s u l t si m p l yt h a tm a n d a r i nf i s hM P O m a y h a v ea s i m i

10、 l a rs t r u c t u r ea n d c a t a l y t i cm e c h a n i s m a sm a m m a l ．T h eO R F o fg p 9 1 p h o xs u b u n i tw i t h l 6 9 8 n u c l e o t i d e sm a yt r a n s l a t ep r o d u c to f5 6 5a m i n o a c i d

11、s ．N - t e r m i n a la m i o n a c i d sc a n f o r ms i xt r a n s m e n b r a n c e a - h e l i c e s t h a tc o n t a i nt h r e eN ·g l y c o s y l a t i o ns i t e sa n dt w oh e m e g r o u p s ．T h eO R F o

12、f p 2 2 p h o x c o n t a i n5 6 1 n u c l e o t i d e sf o r 1 8 6a m i n oa c i d s ．T h eh y d r o p h o b i c a n a l y s i s o f N —t e r m i n a p 2 2 p h o xp r e d i c t s t h r e e t r a n s m e n b r a n c e a

13、—h e l i c e s ．C —t e r m i n a l h a s ap r o l i n e —r i c hr e g i o n ．O R Fo fp 6 7 p h o xi s 1 4 8 8n u c l e o t i d e st h a t e n c o d e a 4 9 5a m i n oa c i dp e p t i d e ．T h ep 6 7 p h o xp r o t e i nc

14、 o n t a i n sf o u r 皿R ( t e t r a t r i c o p e p t i d er e p e a t ) m o t i f , aP B l d o m a i n a n dt w oS H 3 d o m a i n s ．O R Fo f p 4 7 p h o xc o n t a i n1 2 0 9n u c l e o t i d e sf o r4 0 2a m i n oa

15、c i d s ．T h ep 4 7 p h o xp r o t e i nc o n t a i n sa P X p r o f i l ea n da S H 3 p r o f i l e ．O R F o f p 4 0 p h o xi s 1 0 5 0n u c l e o t i d e st h a te n c o d ea 3 4 9 a m i n oa c i dp e p t i d e ．T h ep

16、 4 0 p h o x p r o t e i nc o n t a i n sa P X d o m a i na n d a n S H 3 d o m a i n ．I ti sl o w e r i d e n t i t yb yc o m p a r i n g t h ed e d u c e d a m i n oa c i ds e q u e n c e o f e a c hs u b u n i tw i t

17、h r e s p e c t i v ec o u n t e r p a r to fh u m a n ’S ，b u t t h e yh a v es o m es i m i l a rf u n c t i o n a ld o m a i n sa n d c o n s e r v a t i v es i t e s ．S oi ts u g g e s t e dt h a tN A D P H o x i d a

18、 s eo fm a n d a r i n f i s hm i g h t h a v es i m i l a rf u n c t i o n a sh u m a n ’S ．T h e e x p r e s s i o n p r i m e r sw e r e d e s i g n e d a c c o r d i n g t Op a r to fc D N A s e g m e n t o fm a n d