赤雹化學(xué)成分的研究及多糖含量測定.pdf

1、赤雹為葫蘆科赤雹屬植物赤雹(Thladiantha dubiaBunge)的干燥果實，主要分布于東北華北地區(qū)，具有理氣、活血、降逆、理濕等功效。在我省承德地區(qū)民間用赤雹果實的水煎液治療腰腿疼痛和腰部扭傷，療效顯著。佟繼銘報道赤雹水提液具有很強(qiáng)的鎮(zhèn)痛、抗炎和抗過敏作用，并且水提物部分活性最強(qiáng)。但是有關(guān)赤雹果化學(xué)成分的報道較少，Nagao T等從赤雹的根中分離得到了6個三萜皂苷類化合物赤雹苷A、B、C、D、E、F。李蘭芳等采用氣相色譜．質(zhì)譜

2、聯(lián)用儀(GC-MS)對赤雹果實中揮發(fā)油進(jìn)行了分析研究。本文采用現(xiàn)代色譜技術(shù)對其化學(xué)成分進(jìn)行提取、分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定，并對其多糖成分進(jìn)行了含量測定，為尋找赤雹鎮(zhèn)痛抗炎活性成分并將其開發(fā)成新的鎮(zhèn)痛抗炎藥物提供理論依據(jù)。 目的： 對赤雹果實的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)研究，采用系統(tǒng)溶劑萃取法和硅膠、聚酰胺及葡萄糖凝膠柱色譜等分離方法對其化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)分離得到單體化合物，運(yùn)用UV、IR、<'1>H-NMR、<'13>C-NMR、MS等現(xiàn)

3、代化的波譜鑒定技術(shù)分析確定結(jié)構(gòu)式，為尋找其鎮(zhèn)痛抗炎活性成分提供基礎(chǔ)性研究。采用苯酚-硫酸比色法對赤雹的多糖成分進(jìn)行含量測定。 方法： 1、赤雹化學(xué)成分的系統(tǒng)預(yù)試驗：取干燥赤雹果實4份，每份10 g，分別制成酸性乙醇提取液、水提取液、甲醇提取液以及石油醚提取液。按照化學(xué)成分系統(tǒng)預(yù)實驗的方法對赤雹果中所含各類化學(xué)成分進(jìn)行檢識。 2、赤雹化學(xué)成分的提取、分離及結(jié)構(gòu)鑒定：取干燥赤雹2 kg用95％乙醇回流三次，合并濾液濃縮得12

4、20.7 g浸膏，依次用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正工醇萃取，分別得各部分萃取物。其中石油醚萃取物蒸干加甲醇溶解，甲醇溶解部分經(jīng)硅膠柱色譜分離，F(xiàn)r[10-18]結(jié)晶得白色顆粒狀結(jié)晶Ⅳ，F(xiàn)r[37-40]得白色顆粒狀結(jié)晶Ⅰ，F(xiàn)r[51-59]得白色針狀結(jié)晶Ⅱ，F(xiàn)r[120-123]再次經(jīng)硅膠柱色譜分離得白色顆粒狀結(jié)晶Ⅲ。甲醇不溶部分經(jīng)硅膠柱色譜分離，F(xiàn)r 3再次經(jīng)硅膠柱色譜分離得白色針狀結(jié)晶Ⅴ，F(xiàn)r[21-23]再次經(jīng)硅膠柱色譜分離得白色

5、固體Ⅵ，經(jīng)GC-MS檢測為多個長鏈脂肪烴的混合物。Fr 369結(jié)晶得白色片狀結(jié)晶Ⅶ。乙醚部分經(jīng)丙酮萃取后，丙酮不溶物經(jīng)硅膠柱色譜分離得白色針晶，經(jīng)測定，與化合物Ⅲ為同一種物質(zhì)。乳化層部分經(jīng)硅膠柱色譜和SepherdexLH-20柱色譜分離純化得到白色顆粒狀結(jié)晶Ⅷ。正丁醇部分經(jīng)硅膠柱色譜和Sepherdex HL-20柱色譜分離純化得到白色針狀結(jié)晶Ⅸ。3、赤雹多糖的含量測定：采用苯酚-硫酸法通過觀察多糖的紫外吸收測定多糖的含量：(1)多糖

6、提取與精制：采用加熱回流法提取多糖，經(jīng)去脂、去蛋白等步驟純化，干燥后得精制多糖。(2)苯酚試液的制備：將苯酚蒸餾后，加水溶解，備用。(3)供試品溶液的制備：供試品采用超聲水液提取法，定容后備用。(4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：配置合適濃度的葡萄糖溶液，選擇合適的波長，測定吸收度。(5)重現(xiàn)性實驗：精密稱取5份藥材制備供試品溶液，測定吸收度，考察分析方法重現(xiàn)性。(6)加樣回收率實驗：稱取已知含量的樣品，準(zhǔn)確加入一定量的對照品溶液，計算加樣回收率。(

7、7)精密度實驗：精密稱取5份藥材制備供試品溶液，測定吸收度，考察分析方法精密度。(8)穩(wěn)定性實驗：測定多糖溶液、標(biāo)準(zhǔn)品溶液、樣品溶液在一個小時之內(nèi)的吸光度以測定穩(wěn)定性。 結(jié)果： 1、赤雹化學(xué)成分經(jīng)經(jīng)系統(tǒng)預(yù)試驗結(jié)果表明其果實中含有生物堿、甾醇、香豆素、有機(jī)酸、鞣質(zhì)、糖及苷類、蛋白質(zhì)、氨基酸、油脂等類成分。 2、赤雹的化學(xué)成分研究：通過溶劑提取法和色譜法從赤雹果中提取分離得到8個單體化合物，1個同系脂肪烴類化合物，另

8、2個化合物結(jié)構(gòu)待定。其中6個單體化合物經(jīng)波譜測定確定了結(jié)構(gòu)，它們分別為棕櫚酸(Ⅰ)、α-菠甾醇(Ⅱ)、α-菠甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅲ)、三十烷醇(Ⅳ)、α-菠甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷-6'-棕櫚酸酯(Ⅶ)、甘露醇(Ⅸ)。同系脂肪烴類化合物為：二十四烷烴、二十五烷烴……至三十烷烴(Ⅵ)。3、赤雹多糖的含量測定：測定波長選在488 nm，苯酚-硫酸顯色，回歸線性方程為A=12.862C+0.0069，線性關(guān)系良好(r=0.9

9、992)，赤雹果實中多糖含量為3.43％，重現(xiàn)性RSD=3.44％，加樣回收率RSD=1.81％，樣品溶液穩(wěn)定性RSD=1.86％。 結(jié)論： 化學(xué)成分研究中提取溶劑、提取方法選擇適當(dāng)，采用硅膠、聚酰胺、葡聚糖凝膠等柱色譜法對赤雹的化學(xué)成分實現(xiàn)了較好的分離及純化。分離并確定了6個化合物的結(jié)構(gòu)，除棕櫚酸以外5個為首次從赤雹屬植物中發(fā)現(xiàn)，α-菠甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷-6'-棕櫚酸酯是在葫蘆科中首次分離得到，為進(jìn)一步研究