FQ-PCR及RNA實(shí)時(shí)熒光恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)在兒童肺炎支原體肺炎診治中的價(jià)值.pdf

1、研究背景及目的：
　　肺炎支原體（MP）引起的肺炎支原體肺炎（MPP）好發(fā)于學(xué)齡前及學(xué)齡兒童，占兒童社區(qū)獲得性肺炎的10-40％。MPP在臨床表現(xiàn)、影像學(xué)上無(wú)特異性，對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素天然耐藥而首選大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)治療。近年我國(guó)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)耐藥肺炎支原體（MRMP）逐漸增多，MRMP感染可能導(dǎo)致患兒病情加重及治療困難,而大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物過(guò)度使用又會(huì)導(dǎo)致耐藥發(fā)生。故早期、準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法對(duì)臨床診斷MP感染和指導(dǎo)治療至關(guān)重要。本研究采用實(shí)

2、時(shí)熒光定量PCR（FQ-PCR）及RNA實(shí)時(shí)熒光恒溫?cái)U(kuò)增（SAT）技術(shù)檢測(cè)MP，以了解FQ-PCR及SAT技術(shù)的早期診斷價(jià)值；評(píng)價(jià)MPP患兒急性期痰液MP-DNA載量與臨床特征的相關(guān)性；并主要探討MPP患兒經(jīng)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)治療1個(gè)療程后痰液MP-RNA結(jié)果與MP載量、MP耐藥、臨床療效等的關(guān)系，評(píng)價(jià)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物的治療效果，為判斷支原體肺炎疾病的病情，轉(zhuǎn)歸及預(yù)后提供新思路。另外，免疫炎癥因子的水平可能可以預(yù)測(cè)疾病的嚴(yán)重程度。
　　方法

3、：
　　選取2015年6月-2016年11月期間于我院住院并確診為MPP的60例患兒，在入院當(dāng)天（急性期）和經(jīng)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)治療1療程結(jié)束后當(dāng)天（治療后)同時(shí)采用FQ-PCR檢測(cè)痰液MP-DNA、SAT檢測(cè)痰液MP-RNA，ELISA檢測(cè)血清MP-IgM抗體，比較三種檢測(cè)方法的陽(yáng)性率；選取其中血清MP-IgM為陽(yáng)性，急性期MP-RNA及MP-DNA均陽(yáng)性，且院前未經(jīng)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)治療的50例MPP患兒為主要研究對(duì)象，巢式PCR聯(lián)合DNA測(cè)

4、序技術(shù)檢測(cè)MP23SrRNA基因突變，分析大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)耐藥率及基因突變特點(diǎn)，同時(shí)采用ELISA方法檢測(cè)患兒血清的IL-10、IFN-γ、TNF-α水平，并收集進(jìn)行臨床分析。50例患兒根據(jù)不同標(biāo)準(zhǔn)分組：①根據(jù)急性期痰液MP-DNA載量（以106copies/ml為界限）分為低菌量組18例（MP-DNA≤106copies/ml）與高菌量組32例（MP-DNA＞106copies/ml）；比較兩組MPP患兒在臨床癥狀、肺外并發(fā)癥、實(shí)驗(yàn)室檢查、

5、影像學(xué)、治療上的差別。②根據(jù)經(jīng)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物治療1療程后痰液MP-RNA檢測(cè)結(jié)果：分為MP-RNA陽(yáng)性組28例和MP-RNA轉(zhuǎn)陰組22例；比較兩組MPP患兒在MP-DNA載量， MP耐藥，臨床療效，實(shí)驗(yàn)室檢查，影像學(xué)，治療上的差別。
　　結(jié)果：
　　1、60例MPP患兒中，急性期檢測(cè)MP陽(yáng)性率血清學(xué)為55%，F(xiàn)Q-PCR為90.0%， SAT技術(shù)為88.3%，急性期FQ-PCR、SAT技術(shù)檢測(cè)MP陽(yáng)性率明顯高于血清學(xué)，差異有

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），F(xiàn)Q-PCR與SAT之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后復(fù)測(cè)MP陽(yáng)性率血清學(xué)86.7%，F(xiàn)Q-PCR為76.7%， SAT為50.0%，F(xiàn)Q-PCR、血清學(xué)檢測(cè)MP陽(yáng)性率明顯高于SAT，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），F(xiàn)Q-PCR與血清學(xué)之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2、與急性期低菌量組MPP患兒相比，急性期高菌量組MPP患兒總熱程、使用大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)后熱程、住院時(shí)間更長(zhǎng)，總

7、熱程≥7d及高熱患兒的比例更高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)室檢查上，高菌量組外周血淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及絕對(duì)值低于低菌量組，而中性粒細(xì)胞百分比、IL-10水平高于低菌量組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3、比較治療后MP-RNA陽(yáng)性組與MP-RNA轉(zhuǎn)陰組，①兩組患兒急性期痰液MP-DNA拷貝數(shù)相關(guān)性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；MP-RNA陽(yáng)性組中治療前后痰液MP-DNA拷貝數(shù)下降程度＜10倍的比例較MP-

8、RNA轉(zhuǎn)陰組更高，而治療前后MP-DNA拷貝數(shù)下降程度≥1000倍的比例較MP-RNA轉(zhuǎn)陰組明顯更低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。②MP-RNA陽(yáng)性組患兒含耐藥基因率高于MP-RNA轉(zhuǎn)陰組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。③與治療后MP-RNA轉(zhuǎn)陰組MPP患兒相比，MP-RNA陽(yáng)性組MPP患兒的住院時(shí)間、總發(fā)熱時(shí)間、退熱時(shí)間、咳嗽緩解時(shí)間更長(zhǎng)，血清IFN-γ水平更高，聯(lián)合激素及其他抗菌藥物治療的比例更高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

9、＜0.05）；在其他實(shí)驗(yàn)室檢查、影像學(xué)及大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)治療上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、FQ-PCR及RNA實(shí)時(shí)熒光恒溫?cái)U(kuò)增（SAT）技術(shù)檢測(cè)兒童MP感染早期陽(yáng)性率明顯高于血清學(xué)。
　　2、兒童MPP急性期痰液MP-DNA載量與臨床特征有相關(guān)性，高菌量組患兒病情相對(duì)更為嚴(yán)重。
　　3、SAT技術(shù)檢測(cè)MPP患兒痰MP-RNA可反映疾病病情及大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)治療療效。當(dāng)經(jīng)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物治療1療程后M