新興持久性有機污染物胚胎發(fā)育毒性干細胞評價模型的建立.pdf

1、目的：建立兩種性別的小鼠胚胎干細胞實驗（EST）模型，用致畸背景已知的模式化合物進行暴露后，根據(jù)分子生物學終點數(shù)據(jù)驗證所建立的模型評價胚胎毒性的有效性，并用該模型評價新興污染物中全氟辛磺酸鹽（PFOS）和十溴聯(lián)苯醚（BDE209）的胚胎毒性。
　　方法：體外培養(yǎng)小鼠成纖維細胞3T3和小鼠胚胎干細胞R1系和SP3系，通過形態(tài)學觀察、堿性磷酸酶（AKP）染色和干性標記物Oct4和Ssea-1基因的表達情況對ES進行多能鑒定；利用X染色

2、體和Y染色體特異性的基因Zfx和Sry對ES的性別進行鑒定；之后誘導兩種ES細胞向心肌細胞分化，并用心肌特異性標記物心肌蛋白輕鏈（MLC）對分化的具搏動能力的細胞進行鑒定，并比較不同細胞密度在相同分化操作條件下分化為具搏動能力心肌細胞的陽性率；在確定定向誘導分化方法可行的前提下，使細胞暴露于不同濃度的模式化合物后計算各化合物的半數(shù)致死劑量（IC50）和半數(shù)分化抑制劑量（ID50），并根據(jù)歐洲替代試驗方法驗證中心（EURL ECVAM）提

3、出的胚胎毒性評價方法，驗證建立的EST模型對化合物致畸可能性評價的有效性；進一步用建立的有效的EST模型，獲得新興污染物中PFOS和BDE209的IC50和 ID50，并進行胚胎毒性評價。
　　結果：1.成功建立了基于R1 ES和SP3 ES的兩種性別的EST模型；
　　2.建立的EST模型評價模式化合物結果與模式化合物的背景一致，即所建立的EST模型可準確評價化合物的胚胎毒性；
　　3.PFOS對3T3細胞的IC50

4、為33.18±1.57μg/ml，對R1 ES的IC50為22.34±1.23μg/ml，對SP3 ES的IC50為20.74±1.04μg/ml，對R1 ES的ID50為55.06±3.73μg/ml，對SP3 ES的ID50為52.08±4.48μg/ml；根據(jù)EST的判斷標準，兩個EST模型均判斷PFOS為弱胚胎毒性化合物；
　　4. BDE209對3T3細胞的IC50為30.06±2.19μg/ml，對R1 ES的IC50