苦參堿抑制人惡性黑素瘤A375細胞株侵襲轉移的體外實驗研究.pdf

1、浙江大學碩士學位論文苦參堿抑制人惡性黑素瘤A375細胞株侵襲轉移的體外實驗研究姓名：劉曉艷申請學位級別：碩士專業(yè)：皮膚病與性病學指導教師：方紅20060401浙江大學碩士學位論文益引起人們的興趣，有關實驗和臨床研究方興未艾。但苦參堿對MM細胞增殖和凋亡影響的相關研究罕見報道。本研究以體外培養(yǎng)的人惡性黑素瘤A375細胞(以下簡稱A375細胞)為研究對象，觀察苦參堿對MM細胞增殖和凋亡的影響。方法l、MTT法檢測苦參堿對A375細胞增殖的作

2、用設025m咖L、05m∥mL、1Om咖L和2Om咖L苦參堿干預組，對照組僅加等量的培養(yǎng)液，各濃度復4孔。每隔2d更換含同樣藥物濃度的新鮮培養(yǎng)液，分別培養(yǎng)16d，加入MTT繼續(xù)孵育4h后，酶標儀測570nm吸光度(A)值。實驗重復3次疆日胞增殖抑制率=(對照組A值處理組A值)，對照組A值100％。2、流式細胞儀檢測苦參堿對A375細胞凋亡的作用設對照組及0125m∥mL、O25m咖L、O5m∥mL和1Om咖L苦參堿干預組，各濃度復3瓶。

3、藥物作用48h后收集細胞，取100此細胞懸液于5mL流式管中，加入AIlIlcxinVF11℃和PI各5皿，室溫避光孵育15mjn后在流式細胞儀上測定。實驗重復3次。3、細胞形態(tài)觀察設對照組及O25m咖L、05m咖L和1Omg，mL苦參堿干預組。藥物作用48h后收集細胞。10％甲醛固定，HE染色，倒置光學顯微鏡下觀察細胞形態(tài)。用25％的戊二醛固定2h，固定脫水包埋后，透射電鏡下觀察細胞超微結構。4、統(tǒng)計學處理數(shù)據(jù)以i士s表示。應用sPs