銀屑平顆粒藥效實(shí)驗(yàn)及作用機(jī)理的探討.pdf

1、研究目的
　　 通過豚鼠銀屑病樣動(dòng)物模型,檢測(cè)銀屑平顆粒在形態(tài)、組織病理學(xué)和細(xì)胞因子水平上對(duì)銀屑病的影響；通過小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成的模型、小鼠陰道上皮細(xì)胞有絲分裂模型,觀察銀屑平顆粒對(duì)上皮細(xì)胞角化不全和角化過度的影響；通過小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn),觀察銀屑平顆粒的急性毒性。從而探討銀屑平顆粒的藥效及作用機(jī)理和它的安全性,為銀屑平顆粒的開發(fā)研究和臨床應(yīng)用提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 研究方法
　　 1.銀屑平顆粒對(duì)豚鼠

2、銀屑病樣動(dòng)物模型的影響:選用70只豚鼠,220—300g,雄性。按體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、銀屑靈組、甲氨喋呤組、銀屑平顆粒高、中、低劑量組,10只/組,除正常對(duì)照組外,其余各組涂抹5％心得安乳劑,0.1ml/cm2,2次/天,連續(xù)涂2周,制成豚鼠銀屑病模型。第15天開始各組分別給予藥物,銀屑平顆粒高、中、低三個(gè)劑量組3.34g、1.67g、0.84g生藥/kg體重,銀屑靈組9.46g/kg體重,甲氨喋呤組0.73mg/kg體

3、重,均0.35m1/100g體重,正常對(duì)照組、模型對(duì)照組給予相同體積的蒸餾水,連續(xù)2周,1次/天。末次給藥1h后,用20％烏拉坦(0.5m1/100g)腹腔注射麻醉,取雙耳,左耳迅速放入碎冰冷凍,保存于-20℃?zhèn)溆?用作檢測(cè)細(xì)胞因子TNF—α和ICAM-1；右耳用作病理切片,置10％甲醛溶液中固定,石蠟包埋,切片,常規(guī)HE染色,進(jìn)行組織病理改變程度比較。實(shí)驗(yàn)整個(gè)過程注意觀察豚鼠一般情況及雙耳形態(tài)的變化。
　　 2.銀屑平顆粒對(duì)小

4、鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成的影響:用ICR小鼠50只,20—22g,雌雄各半。按體重隨機(jī)分為對(duì)照組、銀屑靈組、銀屑平顆粒高、中、低劑量組,10只/組,銀屑平顆粒高、中、低三個(gè)劑量組灌胃給予8.54g、4.27g、2.14g生藥/kg體重,對(duì)照組和銀屑靈組分別給予等體積蒸餾水和銀屑靈24.2g生藥/kg體重,連續(xù)給藥14天,0.2ml/10g體重,1次/天。末次給藥后第二天處死小鼠,在距跟部約1.Bcm處取一鼠尾長(zhǎng)方形皮片,常規(guī)制片,光鏡下

5、計(jì)數(shù)小鼠尾部表皮每100個(gè)鱗片中有顆粒層的鱗片數(shù)。
　　 3.銀屑平顆粒對(duì)小鼠陰道上皮細(xì)胞有絲分裂的影響:用60只小鼠,20—25g,雌性。按體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、甲氨喋呤組、銀屑平顆粒高、中、低劑量組,每組10只,除正常對(duì)照組外,其余各組連續(xù)3天腹腔注射己烯雌酚,1次/天,每次0.2mg/只,造成小鼠陰道上皮處于動(dòng)情期。第4天,分別灌胃給藥,銀屑平顆粒高、中、低三個(gè)劑量組8.54g、4.27g、2.14g生藥/k

6、g體重,甲氨喋呤組1.87mg/kg體重,正常對(duì)照組、模型對(duì)照組給予相同體積的蒸餾水,連續(xù)3天,0.2ml/10g體重,1次/天。末次給藥后1小時(shí)每只鼠均灌胃秋水仙堿4mg/kg,秋水仙堿使陰道細(xì)胞紡錘體無法形成,有絲分裂停止于M期的中期。8小時(shí)后脫頸椎處死小鼠,取陰道標(biāo)本,常規(guī)制片,在光鏡下計(jì)算每100個(gè)基底細(xì)胞中有絲分裂數(shù),即有絲分裂指數(shù)。
　　 4.急性毒性實(shí)驗(yàn)；選用40只ICR小鼠,20-22g,雌雄各半。實(shí)驗(yàn)前禁食不禁

7、水16h,按體重隨機(jī)分為對(duì)照組、給藥組,給藥前稱重,24h內(nèi)分2次(間隔6h)灌胃分別給予最大濃度2.6g生藥/ml、最大體積0.8ml/10g體重的藥物和蒸餾水,相當(dāng)于成人臨床用量的536倍,觀察小鼠死亡數(shù)及一般情況,連續(xù)觀察14天,每天稱重一次,檢測(cè)藥物對(duì)小鼠的急性毒性。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　 1.豚鼠銀屑病樣動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)中,銀屑平顆粒組對(duì)豚鼠一般情況和雙耳形態(tài)均有不同程度的改善,耳部皮膚病理變化程度明顯輕于模型

8、對(duì)照組,細(xì)胞因子TNF-α和ICAM-1水平不同程度地低于模型對(duì)照組。
　　 2.銀屑平顆粒組小鼠尾部鱗片中有顆粒層形成的鱗片數(shù)明顯多于對(duì)照組。
　　 3.銀屑平顆粒組小鼠陰道上皮細(xì)胞有絲分裂指數(shù)顯著低于模型對(duì)照組。
　　 4.在急性毒性實(shí)驗(yàn)中,小鼠無死亡,觀察14天后,小鼠體重及一般情況與對(duì)照組相比沒有顯著性差異。
　　 結(jié)論:
　　 1.銀屑平顆粒可不同程度地改善銀屑病豚鼠的一般情況、雙耳形態(tài)

9、,減輕組織病理狀況,降低細(xì)胞因子水平。
　　 2.銀屑平顆粒可以促進(jìn)小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成,改善動(dòng)物皮膚角化不全狀態(tài)。
　　 3.銀屑平顆?？梢种菩∈箨幍郎掀ぜ?xì)胞有絲分裂,改善動(dòng)物皮膚角化過度狀態(tài)。
　　 4.銀屑平顆粒對(duì)小鼠無急性毒性反應(yīng)。
　　 臨床上銀屑病以尋常型、血熱風(fēng)燥證多見,是多基因遺傳決定、多環(huán)境因素刺激誘導(dǎo),以免疫異常為關(guān)鍵環(huán)節(jié)的皮膚病。銀屑平顆粒是治療銀屑病的臨床經(jīng)驗(yàn)方,有涼血解毒、