頭孢曲松鈉在大鼠足底注射蜂毒引起的炎性痛及痛過(guò)敏和GLT-1表達(dá)下調(diào)中的作用.pdf

1、目的：膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體-1(glial glutamatetransporter-1．，GLT-1)在脊髓傷害性信息傳遞過(guò)程中發(fā)揮重要作用，但在不同的疼痛模型中其作用有所不同。在慢性坐骨神經(jīng)縮窄性損傷(chronic constriction nerve iniury，CCI)、嗎啡耐受等慢性病理性痛過(guò)程中，上調(diào)GLT-1的表達(dá)和功能可抑制痛和痛覺(jué)過(guò)敏的程度，阻斷GLT-1則加劇痛和痛覺(jué)過(guò)敏的產(chǎn)生。而在formalin test以及

2、鞘內(nèi)注射PGE<,2>、PGF<,2a>和NMDA等誘發(fā)的急性痛和痛過(guò)敏過(guò)程中，抑制GLT-1表達(dá)和功能可產(chǎn)生抗傷害性感受的作用。這種差異是不同的疼痛模型所致，還是意味著GLT-1在急性痛和慢性痛中起著相反的作用?更接近臨床病理性痛的疼痛模型和更特異性的GLT-1促進(jìn)劑可為這些問(wèn)題的解決提供可能。 蜂毒(Bee Venom，BV)疼痛模型是一種新的疼痛模型，具有多種疼痛表型。大鼠足底皮下中心部位注入蜜蜂毒溶液不僅引起局部組織炎性

3、紅腫，還引起單相的持續(xù)1-2 h的自發(fā)痛反應(yīng)和較長(zhǎng)時(shí)間(48 h以上)的注射部位原發(fā)性熱和機(jī)械性痛覺(jué)過(guò)敏以及注射對(duì)側(cè)相應(yīng)部位繼發(fā)性熱痛覺(jué)過(guò)敏，更接近臨床病理性痛，是研究炎性病理性疼痛的良好模型。Rothstein 2005年在《Nature》撰文報(bào)道β-內(nèi)酰胺類抗生素如頭孢曲松鈉(Ceftriaxone，Cef)能夠選擇性地增強(qiáng)GLT-1的表達(dá)和功能，為應(yīng)用Cef作為特異性GLT-1增強(qiáng)劑用于疼痛 研究提供了理論依據(jù)。因此，本實(shí)

4、驗(yàn)旨在觀察Cef對(duì)蜂毒炎性痛大鼠自發(fā)痛反應(yīng)及痛覺(jué)過(guò)敏的影響，以及此過(guò)程中GLT-1表達(dá)的改變，進(jìn)一步探討GLT-1在急性炎性痛和痛覺(jué)過(guò)敏中的作用，為病理性疼痛的防治提供新的思路和線索。 方法：雄性Sprague-Dawley大鼠77只，體重230±30g，隨機(jī)分為以下5組(n=11)： 1、對(duì)照組：測(cè)定熱刺激縮足潛伏期和機(jī)械刺激縮足閾值后取材； 2、BV 1 h組：給大鼠足底注射BV溶液致炎性痛模型，測(cè)定注射后0

5、～55分鐘的自發(fā)縮足次數(shù)； 3、BV 4 h組：給大鼠足底注射BV致炎性痛模型，測(cè)定注射后4 h熱刺激縮足潛伏期和機(jī)械刺激縮足閾值； 4、BV 24 h組：給大鼠足底注射BV致炎性痛模型，測(cè)定注射后24 h熱刺激縮足潛伏期和機(jī)械刺激縮足閾值； 5、Cef組：腹腔注射Cef溶液，每日二次，連續(xù)7天。第7日，右足底注射BV溶液致炎性痛模型，測(cè)定注射BV后0～55 min的自發(fā)縮足次數(shù)和注射BV 4 h的熱刺激縮足潛伏

6、期和機(jī)械刺激縮足閾值，分別反映自發(fā)痛和痛覺(jué)過(guò)敏的情況。根據(jù)Cef的劑量，分為100 mg/kg(Cef100+BV4h)組和200 mg/kg(Cef200+BV4h)組。另設(shè)腹腔注射等容積NS的對(duì)照(NS+BV4h)組。 以上各組均于上述預(yù)定的實(shí)驗(yàn)程序結(jié)束后取材測(cè)定脊髓后角GLT-1表達(dá)的變化，其中6只動(dòng)物用于免疫組織化學(xué)染色，5只動(dòng)物用于Western Blot分析。 數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x ±s)表示。采用SPSS

7、統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析(One-Way ANOVA)和t檢驗(yàn)，以P<0.05作為判斷差異顯著性的標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果： 1、自發(fā)縮足次數(shù) 大鼠足底注射BV可以誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生長(zhǎng)達(dá)1 h以上的持續(xù)、單相性的自發(fā)痛反應(yīng)，表現(xiàn)為自發(fā)縮足、舔足甚至咬足行為。高峰時(shí)每5 min的縮足次數(shù)可達(dá)80～90次，至注射后55 min時(shí)減少為25次左右。NS+BV4h組或Cef100+BV4h組動(dòng)物的痛行為表現(xiàn)與單純蜂毒組無(wú)明顯不同；C

8、ef200+BV4h組大鼠的自發(fā)縮足次數(shù)較NS+BV4h組有增多趨勢(shì)，表現(xiàn)為注射蜂毒后25～40 min期間每5 min的自發(fā)縮足次數(shù)增多和注射BV后55 min內(nèi)總累計(jì)自發(fā)縮足反射次數(shù)增多(P<0.05)。 2、熱刺激縮足潛伏期 大鼠足底注射BV后4 h，注射部位熱刺激縮足潛伏期較對(duì)照組明顯縮短，在注射部位對(duì)側(cè)相應(yīng)部位熱刺激縮足潛伏期也有所縮短(P<0.05)；至注射BV后24 h，注射部位及注射部位對(duì)側(cè)相應(yīng)部位熱刺激

9、縮足潛伏期仍短于對(duì)照組水平(P<0.05)；上述變化以注射部位更為顯著。上述結(jié)果表明動(dòng)物出現(xiàn)了熱痛覺(jué)過(guò)敏。NS+BV4h組與BV4h組無(wú)顯著性差異。與NS+BV4h組相比，應(yīng)用Cef后，BV注射部位的原發(fā)性熱刺激縮足潛伏期顯著延長(zhǎng)(P<0.05)，且延長(zhǎng)程度與Cef的劑量成正比，但各劑量組均未延長(zhǎng)至對(duì)照組水平；注射部位對(duì)側(cè)相應(yīng)部位的繼發(fā)性熱刺激縮足潛伏期也呈劑量依賴性延長(zhǎng)(P<0.05)，其中Cef200+BV4h組基本恢復(fù)至對(duì)照組水平

10、。 3、機(jī)械刺激縮足閡值 大鼠足底注射BV后4 h，注射部位機(jī)械刺激縮足閾值較對(duì)照組明顯下降，至注射BV后24 h注射部位機(jī)械刺激縮足閾值仍低于對(duì)照組水平(P<0.05)，表明動(dòng)物出現(xiàn)了機(jī)械痛覺(jué)過(guò)敏；注射部位對(duì)側(cè)相應(yīng)部位未出現(xiàn)明顯的機(jī)械性痛覺(jué)過(guò)敏。NS+BV4h組與BV4h組的機(jī)械刺激縮足閾值無(wú)顯著性差異。與NS+BV4h組相比，Cef組注射部位的機(jī)械刺激縮足閾值有所增加(P<0.05)，具有一定的劑量依賴性，但均未增加

11、至對(duì)照組水平。Cef對(duì)注射部位對(duì)側(cè)相應(yīng)部位的機(jī)械刺激縮足閾值無(wú)明顯影響。 4、GLT-1表達(dá) 免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組大鼠L5脊髓節(jié)段GLT-1陽(yáng)性染色顆粒呈點(diǎn)片狀彌散分布于脊髓后角的各個(gè)板層，Ⅰ ～Ⅱ板層更為密集，左右兩側(cè)無(wú)明顯差異；在同節(jié)段的脊髓白質(zhì)中也可見(jiàn)散在分布。注射BV后1 h脊髓后角GLT-1 的表達(dá)與對(duì)照組相比無(wú)明顯變化，注射BV后4 h及24 h同側(cè)脊髓后角GLT-1的表達(dá)均低于對(duì)照組，尤以4 h明顯

12、，表現(xiàn)為染色面積、積分光密度值明顯減少(P<0.05)。注射對(duì)側(cè)脊髓后角GLT-1陽(yáng)性染色面積、積分光密度與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異(P>0.05)。NS+BV4h組與BV4h組在染色面積和積分光密度方面無(wú)明顯差異。應(yīng)用Cef后，脊髓后角各個(gè)板層GLT-1表達(dá)均較NS+BV4h組顯著增強(qiáng)，但以脊髓后角淺層更為顯著，表現(xiàn)為GLT-1陽(yáng)性染色面積、積分光密度顯著增加(P<0.05)，且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。 Western Blot分析

13、顯示，與對(duì)照組相比，注射BV后1 h大鼠L4～L5脊髓節(jié)段GLT-1的表達(dá)量較對(duì)照組無(wú)明顯差異； 至注射蜂毒后4 h，GLT-1表達(dá)量降低(P<0.05)，且這種降低一直持續(xù)到注射蜂毒后24 h。NS+BV4h組GLT-1 表達(dá)較BV4h組無(wú)明顯差異。Cef組GLT-1表達(dá)量較NS+BV4h組明顯增加(P<0.05)，并且這種增加呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。 結(jié)論：Cef由于其特異性上調(diào)GLT-1的表達(dá)和功能可劑量依賴性地減輕