兒童功能性便秘的流行病學調查、功能分類及部分類型的病理生理基礎研究.pdf

1、本研究從兒童最常見而且尚未解決的問題入手，首先對中國北方具有代表性的城市兒童進行大范圍的流行病學調查，探討北方兒童便秘的患病率，并在調查的基礎上提出我國兒童便秘的診斷標準。應用PCR-SSCP和BOX-PCR技術對正常腸道菌群進行DNA指紋圖譜分析，觀察腸道菌群在正常和便秘兒童腸道中的分布比例關系并結合應用氣相色譜技術觀察細菌代謝產物短鏈脂肪酸在正常和便秘兒童腸道中的分布比例關系，探討腸道菌群及其代謝產物短鏈脂肪酸在兒童功能性便秘發(fā)病中

2、的作用。 材料和方法： 一、流行病學調查 應用分層、整群隨機抽樣方法對中國北方5市(包括北京、天津、沈陽、吉林和哈爾濱)常住兒童中2～14歲的兒童進行問卷調查，調查問卷由專門從事流行病學調查的專家協(xié)助設計，首先進行預調查，然后進行普查，共發(fā)放問卷20000份，其中北京6000份，天津4000份，沈陽4500份，哈爾濱3000份，長春2500份，根據普查結果了解按兒童羅馬Ⅱ標準判斷的FC的檢出率，再對篩出的部分人在

3、醫(yī)院進行精查(結腸傳輸試驗，鋇灌腸及排便造影，消化道測壓)以排除結腸器質性疾病，計算我國北方城市兒童兒童功能性便秘的患病率。詳細記錄與兒童功能性便秘有關的各種危險因素以及與排便有關的各種相關癥狀，對各種危險因素與兒童功能性便秘的關系進行逐步logistic回歸分析，分析其對于兒童功能性便秘的貢獻；按兒童羅馬Ⅱ標準篩選確定便秘組，分析各相關癥狀在便秘組和非便秘組發(fā)生的頻率，用卡方對單因素進行比較，再對有意義的癥狀用logistic回歸模型

4、作擬合優(yōu)度檢測，探討兒童功能性便秘的危險因素，初步制定適合我國兒童的便秘標準。 二、排便功能檢測 研究對象分為對照組和便秘組。對照組33例，平均年齡5歲；便秘組96例，平均年齡6.5歲，均符合兒童功能性便秘羅馬Ⅱ診斷標準；聯(lián)合應用結腸傳輸試驗，X線排便造影和肛門直腸測壓對對照組和便秘組兒童進行全面檢查，分析其影像學及功能學表現(xiàn)的差異，探討這些異常在兒童功能性便秘的病理生理及其對便秘的診斷和分型的意義； 三、慢傳輸

5、性便秘兒童結腸壁內FAAH的表達及意義 研究對象分為便秘組和對照組，對照組16例，其中男10例，女6例，平均年齡7.5歲。便秘組男15例，女7例，平均年齡7歲，均符合STC的標準，分別取上述病例結腸標本，按部位分為升、降和乙狀結腸，其中對照組升結腸5例，降結腸3例，乙狀結腸8例；便秘組升結腸4例，降結腸18例，乙狀結腸22例；應用免疫組化，Western blotting，Real Time PCR對便秘組和對照組兒童結腸壁內F

6、AAH的表達分析，探討FAAH在正常結腸壁內的定位和定量表達及其意義，并聯(lián)合應用免疫熒光雙重染色技術觀察FAAH與CB1受體的位置與分布，探討FAAH在生理條件下對結腸功能進行調控的作用機制；同時還進一步聯(lián)合應用高壓液相色譜技術對便秘組兒童結腸壁內FAAH的生物活性進行定量檢測和分析，探討其在兒童功能性便秘發(fā)病中的作用。 四、功能性便秘兒童腸道菌群DNA指紋圖譜的建立及意義 研究對象分為對照組和便秘組，采用兒童功能性便秘

7、羅馬Ⅱ標準確立便秘組，便秘組15例，男9例，女6例，平均年齡6.5歲；對照組35例，男24例，女11例，平均年齡6歲。取對照組和便秘組所有兒童糞便標本進行分析。應用糞便細菌基因組DNA提取試劑盒提取糞便細菌基因組DNA，分別應用細菌16S rDNA的V3區(qū)引物和BOX基因組重復序列的引物BOX 1R進行擴增，然后進行電泳和圖像分析，分別建立基于16SrDNA和BOX基因組重復序列的糞便細菌DNA指紋圖譜，探討PCR-SSCP和BOX-P

8、CR對于糞便細菌的分離效果及其對糞便細菌菌種鑒定的意義；將擴增產物進行克隆測序，測序后對序列的同源性在GenBank數(shù)據庫中使用BLAST工具進行比較，初步確定細菌的種屬和分類，探討腸道菌群在功能性便秘兒童的變化趨勢及其對便秘產生的意義。 五、功能性便秘兒童糞便短鏈脂肪酸的檢測與分析 應用氣相色譜技術對便秘組和對照組兒童糞便中短鏈脂肪酸的含量進行定量檢測，分析短鏈脂肪酸在功能性便秘兒童腸道內的變化趨勢，進一步探討腸道微生

9、態(tài)菌落及其代謝產物短鏈脂肪酸在兒童功能性便秘發(fā)病中的意義。 結論： (1)兒童FC是兒童期的常見病多發(fā)病，好發(fā)于2～3歲兒童；人工喂養(yǎng)、添加輔食過早、飲食纖維低、挑食偏食、排便恐懼、抑郁、焦慮、體重、遺傳、高經濟收入可能是FC的危險因素，應該對民眾進行廣泛的宣教做針對性預防和治療。 (2)我國兒童FC的癥狀學診斷標準為：①排便次數(shù)<3次/周；②大便干硬成團塊狀；③排便費力；④需要瀉藥協(xié)助排便。具備上述的4個診斷標

10、尺中2條者，癥狀持續(xù)至少2月即可診斷便秘。 (3)兒童功能性便秘可以分為以下幾種類型：①慢傳輸型便秘，近端結腸各節(jié)段傳輸功能異常。②出口梗阻型便秘：結腸出口處肛門直腸區(qū)域存在動力異常。③混合型便秘：同時存在結腸傳輸障礙和出口動力異常；聯(lián)合應用結腸傳輸時間，X線排便造影和肛門直腸測壓對兒童功能性便秘的病因診斷和臨床分型具有重要意義。 (4)人類正常結腸壁內無論是蛋白還是核酸水平均存在FAAH的表達，F(xiàn)AAH主要表達在結腸肌

11、間神經叢的神經元內和腸粘膜表面的吸收細胞和腺體內，在肌間神經叢內FAAH的分布與CB1受體呈對應趨勢。 (5)慢傳輸性便秘兒童結腸壁內FAAH的表達減低，水解活性減弱，F(xiàn)AAH可能參與了慢傳輸性便秘的發(fā)生。 (6)功能性便秘兒童腸道菌群的菌屬多樣性增加，腸道內存在與正常兒童相似的常駐菌，但優(yōu)勢菌種不同，各腸道菌屬間存在比例失調。 (7)功能性便秘兒童糞便中的短鏈脂肪酸含量減少，比例失調，功能性便秘的產生可能與腸道