兒童功能性便秘的流行病學(xué)調(diào)查、功能分類及部分類型的病理生理基礎(chǔ)研究.pdf

1、本研究從兒童最常見而且尚未解決的問題入手，首先對中國北方具有代表性的城市兒童進(jìn)行大范圍的流行病學(xué)調(diào)查，探討北方兒童便秘的患病率，并在調(diào)查的基礎(chǔ)上提出我國兒童便秘的診斷標(biāo)準(zhǔn)。應(yīng)用PCR-SSCP和BOX-PCR技術(shù)對正常腸道菌群進(jìn)行DNA指紋圖譜分析，觀察腸道菌群在正常和便秘兒童腸道中的分布比例關(guān)系并結(jié)合應(yīng)用氣相色譜技術(shù)觀察細(xì)菌代謝產(chǎn)物短鏈脂肪酸在正常和便秘兒童腸道中的分布比例關(guān)系，探討腸道菌群及其代謝產(chǎn)物短鏈脂肪酸在兒童功能性便秘發(fā)病中

2、的作用。 材料和方法： 一、流行病學(xué)調(diào)查 應(yīng)用分層、整群隨機(jī)抽樣方法對中國北方5市(包括北京、天津、沈陽、吉林和哈爾濱)常住兒童中2～14歲的兒童進(jìn)行問卷調(diào)查，調(diào)查問卷由專門從事流行病學(xué)調(diào)查的專家協(xié)助設(shè)計(jì)，首先進(jìn)行預(yù)調(diào)查，然后進(jìn)行普查，共發(fā)放問卷20000份，其中北京6000份，天津4000份，沈陽4500份，哈爾濱3000份，長春2500份，根據(jù)普查結(jié)果了解按兒童羅馬Ⅱ標(biāo)準(zhǔn)判斷的FC的檢出率，再對篩出的部分人在

3、醫(yī)院進(jìn)行精查(結(jié)腸傳輸試驗(yàn)，鋇灌腸及排便造影，消化道測壓)以排除結(jié)腸器質(zhì)性疾病，計(jì)算我國北方城市兒童兒童功能性便秘的患病率。詳細(xì)記錄與兒童功能性便秘有關(guān)的各種危險(xiǎn)因素以及與排便有關(guān)的各種相關(guān)癥狀，對各種危險(xiǎn)因素與兒童功能性便秘的關(guān)系進(jìn)行逐步logistic回歸分析，分析其對于兒童功能性便秘的貢獻(xiàn)；按兒童羅馬Ⅱ標(biāo)準(zhǔn)篩選確定便秘組，分析各相關(guān)癥狀在便秘組和非便秘組發(fā)生的頻率，用卡方對單因素進(jìn)行比較，再對有意義的癥狀用logistic回歸模型

4、作擬合優(yōu)度檢測，探討兒童功能性便秘的危險(xiǎn)因素，初步制定適合我國兒童的便秘標(biāo)準(zhǔn)。 二、排便功能檢測 研究對象分為對照組和便秘組。對照組33例，平均年齡5歲；便秘組96例，平均年齡6.5歲，均符合兒童功能性便秘羅馬Ⅱ診斷標(biāo)準(zhǔn)；聯(lián)合應(yīng)用結(jié)腸傳輸試驗(yàn)，X線排便造影和肛門直腸測壓對對照組和便秘組兒童進(jìn)行全面檢查，分析其影像學(xué)及功能學(xué)表現(xiàn)的差異，探討這些異常在兒童功能性便秘的病理生理及其對便秘的診斷和分型的意義； 三、慢傳輸

5、性便秘兒童結(jié)腸壁內(nèi)FAAH的表達(dá)及意義 研究對象分為便秘組和對照組，對照組16例，其中男10例，女6例，平均年齡7.5歲。便秘組男15例，女7例，平均年齡7歲，均符合STC的標(biāo)準(zhǔn)，分別取上述病例結(jié)腸標(biāo)本，按部位分為升、降和乙狀結(jié)腸，其中對照組升結(jié)腸5例，降結(jié)腸3例，乙狀結(jié)腸8例；便秘組升結(jié)腸4例，降結(jié)腸18例，乙狀結(jié)腸22例；應(yīng)用免疫組化，Western blotting，Real Time PCR對便秘組和對照組兒童結(jié)腸壁內(nèi)F

6、AAH的表達(dá)分析，探討FAAH在正常結(jié)腸壁內(nèi)的定位和定量表達(dá)及其意義，并聯(lián)合應(yīng)用免疫熒光雙重染色技術(shù)觀察FAAH與CB1受體的位置與分布，探討FAAH在生理?xiàng)l件下對結(jié)腸功能進(jìn)行調(diào)控的作用機(jī)制；同時(shí)還進(jìn)一步聯(lián)合應(yīng)用高壓液相色譜技術(shù)對便秘組兒童結(jié)腸壁內(nèi)FAAH的生物活性進(jìn)行定量檢測和分析，探討其在兒童功能性便秘發(fā)病中的作用。 四、功能性便秘兒童腸道菌群DNA指紋圖譜的建立及意義 研究對象分為對照組和便秘組，采用兒童功能性便秘

7、羅馬Ⅱ標(biāo)準(zhǔn)確立便秘組，便秘組15例，男9例，女6例，平均年齡6.5歲；對照組35例，男24例，女11例，平均年齡6歲。取對照組和便秘組所有兒童糞便標(biāo)本進(jìn)行分析。應(yīng)用糞便細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取糞便細(xì)菌基因組DNA，分別應(yīng)用細(xì)菌16S rDNA的V3區(qū)引物和BOX基因組重復(fù)序列的引物BOX 1R進(jìn)行擴(kuò)增，然后進(jìn)行電泳和圖像分析，分別建立基于16SrDNA和BOX基因組重復(fù)序列的糞便細(xì)菌DNA指紋圖譜，探討PCR-SSCP和BOX-P

8、CR對于糞便細(xì)菌的分離效果及其對糞便細(xì)菌菌種鑒定的意義；將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行克隆測序，測序后對序列的同源性在GenBank數(shù)據(jù)庫中使用BLAST工具進(jìn)行比較，初步確定細(xì)菌的種屬和分類，探討腸道菌群在功能性便秘兒童的變化趨勢及其對便秘產(chǎn)生的意義。 五、功能性便秘兒童糞便短鏈脂肪酸的檢測與分析 應(yīng)用氣相色譜技術(shù)對便秘組和對照組兒童糞便中短鏈脂肪酸的含量進(jìn)行定量檢測，分析短鏈脂肪酸在功能性便秘兒童腸道內(nèi)的變化趨勢，進(jìn)一步探討腸道微生

9、態(tài)菌落及其代謝產(chǎn)物短鏈脂肪酸在兒童功能性便秘發(fā)病中的意義。 結(jié)論： (1)兒童FC是兒童期的常見病多發(fā)病，好發(fā)于2～3歲兒童；人工喂養(yǎng)、添加輔食過早、飲食纖維低、挑食偏食、排便恐懼、抑郁、焦慮、體重、遺傳、高經(jīng)濟(jì)收入可能是FC的危險(xiǎn)因素，應(yīng)該對民眾進(jìn)行廣泛的宣教做針對性預(yù)防和治療。 (2)我國兒童FC的癥狀學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)為：①排便次數(shù)<3次/周；②大便干硬成團(tuán)塊狀；③排便費(fèi)力；④需要瀉藥協(xié)助排便。具備上述的4個(gè)診斷標(biāo)

10、尺中2條者，癥狀持續(xù)至少2月即可診斷便秘。 (3)兒童功能性便秘可以分為以下幾種類型：①慢傳輸型便秘，近端結(jié)腸各節(jié)段傳輸功能異常。②出口梗阻型便秘：結(jié)腸出口處肛門直腸區(qū)域存在動(dòng)力異常。③混合型便秘：同時(shí)存在結(jié)腸傳輸障礙和出口動(dòng)力異常；聯(lián)合應(yīng)用結(jié)腸傳輸時(shí)間，X線排便造影和肛門直腸測壓對兒童功能性便秘的病因診斷和臨床分型具有重要意義。 (4)人類正常結(jié)腸壁內(nèi)無論是蛋白還是核酸水平均存在FAAH的表達(dá)，F(xiàn)AAH主要表達(dá)在結(jié)腸肌

11、間神經(jīng)叢的神經(jīng)元內(nèi)和腸粘膜表面的吸收細(xì)胞和腺體內(nèi)，在肌間神經(jīng)叢內(nèi)FAAH的分布與CB1受體呈對應(yīng)趨勢。 (5)慢傳輸性便秘兒童結(jié)腸壁內(nèi)FAAH的表達(dá)減低，水解活性減弱，F(xiàn)AAH可能參與了慢傳輸性便秘的發(fā)生。 (6)功能性便秘兒童腸道菌群的菌屬多樣性增加，腸道內(nèi)存在與正常兒童相似的常駐菌，但優(yōu)勢菌種不同，各腸道菌屬間存在比例失調(diào)。 (7)功能性便秘兒童糞便中的短鏈脂肪酸含量減少，比例失調(diào)，功能性便秘的產(chǎn)生可能與腸道