中藥復(fù)方消瘤平的抗腫瘤作用研究.pdf

1、惡性腫瘤嚴(yán)重威脅著人類的生命健康，世界各地惡性腫瘤發(fā)病率及死亡率一直呈上升趨勢(shì)，在我國(guó)腫瘤死亡分別占城市及農(nóng)村居民死因的第1位和第2位。惡性腫瘤的治療有手術(shù)、放療及化療，而化療以合成藥物為主?；熕幰至鲂Ч隙?，但毒副作用廣泛而嚴(yán)重，且存在耐藥問(wèn)題。中藥尤其是中藥復(fù)方治療腫瘤系從整體考慮，辯證施治，扶正祛邪，通過(guò)提高機(jī)體免疫功能而抑制腫瘤。消瘤平(簡(jiǎn)稱為XLP)系由靈芝、卷柏、黃芪、白花蛇舌草等組成的中藥復(fù)方，符合中醫(yī)治療腫瘤的“扶正固

2、本、軟堅(jiān)散結(jié)、清熱解毒”等治則。作者將該復(fù)方的水提液、醇提液及水提醇沉液混合濃縮制成浸膏作為供試品，從整體動(dòng)物、細(xì)胞和分子水平探討了該藥的抗腫瘤作用及其可能的作用機(jī)理。 一、XLP對(duì)荷瘤小鼠的抑瘤作用 小鼠接種S180腫瘤后隨機(jī)分為陰性對(duì)照，XLP17、8.5，4.3g/kg組和陽(yáng)性對(duì)照(FT-207，30mg/kg)5組，灌胃給藥12天后，處死取瘤稱重，計(jì)算抑瘤率。結(jié)果顯示XLP三個(gè)劑量組均有抑瘤作用(p＜0.01)。

3、 二、XLP對(duì)CTX治療荷瘤小鼠的增效作用 小鼠接種H22瘤液后分為陰性對(duì)照、CTX(50mg/kg)、CTX+XLP-L(4.3g/kg)、CTX+XLP-M(8.5g/kg)及CTX+XLP-H(17g/kg)5組。給藥，XLP灌胃每日一次，CTX腹腔注射隔日一次。12天后，處死取瘤稱重。計(jì)算抑瘤率。結(jié)果合用XLP中、高劑量組對(duì)CTX治療H22腫瘤有增效作用(p＜0.01，p＜0.05)。 三、XLP對(duì)化療藥

4、治療荷瘤小鼠的減毒作用 小鼠分組、接種S180(或EAC)后分組，給藥12天。眼眶取血，加入白細(xì)胞稀釋液，鏡下計(jì)數(shù)。比較各組小鼠白細(xì)胞數(shù)。結(jié)果顯示，XLP4.3g/kg單用可提高荷EAC鼠的白細(xì)胞數(shù)(p＜0.05)；XLP中、高劑量(8.5、17g/kg)可抑制FT-207治療荷H22和EAC小鼠所致白細(xì)胞降低作用(p＜0.05，p＜0.01)。 四、含XLP血清對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用 大鼠分陽(yáng)性對(duì)照(FT-207

5、)，XLP高、中、低劑量(17、8.5、4.3g/kg)、陰性對(duì)照5組，每天灌胃給藥2次。7次后麻醉固定，腹主動(dòng)脈取血，靜置3h后離心取上清，滅活后過(guò)濾除菌。所得血清樣品加入腫瘤細(xì)胞中，96孔板中培養(yǎng)48h，加MTT，繼續(xù)培養(yǎng)4h后取出，去上清，加入DMSO溶解，于酶標(biāo)儀上570nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值；計(jì)算抑制率。結(jié)果：XLP(8.5g/kg)可以抑制B16細(xì)胞的生長(zhǎng)(p＜0.01)；XLP(17g/kg)可抑制S180和HepG-2細(xì)胞的

6、生長(zhǎng)(p＜0.01)；XLP(17、8.5g/kg)可抑制H22和NKM細(xì)胞的生長(zhǎng)(p＜0.01，p＜0.05)。 五、XLP對(duì)荷瘤小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響 小鼠分組接種給藥，10天后斷頭放血，取腹腔細(xì)胞，洗滌、計(jì)數(shù)、重懸，培養(yǎng)皿中孵育24h后消化收集細(xì)胞，離心、洗滌、計(jì)數(shù)、重懸；加入雞紅細(xì)胞，37C水浴30分鐘，離心棄上清，以懸浮細(xì)胞涂片，甲醇固定、Gimsa染色，油鏡下數(shù)100個(gè)巨噬細(xì)胞，計(jì)算吞噬百分率及吞噬指數(shù)并

7、作比較。結(jié)果：XLP(17、8.5、4.3g/kg)可以增強(qiáng)荷S180小鼠MФ的吞噬率(p＜0.01，p＜0.01，p＜0.05)。 六、XLP對(duì)ConA誘導(dǎo)的荷瘤小鼠T細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響 小鼠接種分組，給藥10天。無(wú)菌取脾制備細(xì)胞懸液。96孔板中加細(xì)胞懸液20μ1/孔，再加ConA(8μg/ml)。37℃孵育72h。加MTT培養(yǎng)4h，離心棄上清，加DMSO溶解后酶標(biāo)儀上570nm處測(cè)定OD值。結(jié)果顯示，XLP三個(gè)劑量組

8、小鼠T增殖能力均較對(duì)照組增強(qiáng)(均為p＜0.01)。 七、XLP對(duì)荷瘤小鼠NK細(xì)胞活性的影響 小鼠分組、接種、給藥，取脾制備NK細(xì)胞懸液，與K562細(xì)胞按50：1比例加入96孔板共孵育4h，棄上清加MTT，孵育4h，去上清，加DMSO溶解后酶標(biāo)儀上570nm處測(cè)OD值，計(jì)算各組NK細(xì)胞活力并作比較。結(jié)果：XLP(17、8.5、4.3g/kg)組荷瘤小鼠NK細(xì)胞活性均較陰性組提高(p＜0.01)。 八、XLP對(duì)荷瘤小

9、鼠LAK細(xì)胞活性的影響 小鼠分組、接種、給藥，制各脾細(xì)胞懸液，IL-2(1000U/m1)條件下孵育96h誘導(dǎo)出LAK細(xì)胞，與K562細(xì)胞按50：1比例加入96孔板共孵育4h，加MTT培養(yǎng)4h，570nm測(cè)OD值，計(jì)算LAK活力并作比較。結(jié)果：XLP(17g/kg，8.5g/kg，4.3g/kg)可以提高荷S180小鼠LAK細(xì)胞活性(p＜0.01)。 九、XLP對(duì)荷瘤小鼠B細(xì)胞功能的影響 小鼠分組、接種、給藥；給

10、藥第5天以5％SRBC0.2ml(i.p)免疫，第11天停藥，取脾制備細(xì)胞懸液(5×106/m1)。試管中加入脾細(xì)胞、0.2％SRBC懸液及補(bǔ)體稀釋液各1ml，37℃水浴60min；離心取上清，413nm測(cè)OD值。結(jié)果：XLP(8.5、4.3g/kg)可f強(qiáng)荷S180小鼠B細(xì)胞產(chǎn)生抗體能力(p＜0.01)。 十、XLP對(duì)荷瘤小鼠脾細(xì)胞產(chǎn)生IL-2的影響 小鼠接種、分組、給藥，取脾制備細(xì)胞懸液。24孔板中加入脾細(xì)胞及Con

11、A(5μg/m1)各1ml,培養(yǎng)24h，離心取上清作為待測(cè)樣品。96孔板中加入脾細(xì)胞、CTLL-2細(xì)胞、樣品(或IL-2標(biāo)準(zhǔn)品)共孵育20h，加入MTT孵育4h，570nm測(cè)OD值；以IL-2對(duì)數(shù)濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)作圖，求出標(biāo)準(zhǔn)曲線、回歸方程及各給藥組的IL-2產(chǎn)生量并作比較。結(jié)果：XLP(17、8.5g/kg)可增強(qiáng)荷S180小鼠淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IL-2的能力(p＜0.01)。 十一、XLP對(duì)荷瘤小鼠脾細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α