活性指導(dǎo)下中藥獨活與延胡索抗腫瘤有效成分的分離及其抑瘤作用研究.pdf

1、第一部分研究背景 惡性腫瘤嚴重威脅人類健康。在抗腫瘤治療的手段中，藥物治療占據(jù)著十分重要的地位。目前抗腫瘤藥物的研發(fā)和應(yīng)用的方向，主要是化療藥物的個體化運用和分子靶向藥物的研制，然而這些藥物帶來的不良反應(yīng)、藥物作用靶點的單一性及其昂貴的費用等，是其發(fā)展的瓶頸。中醫(yī)藥在抗腫瘤方面的應(yīng)用有著悠久的歷史和堅實的基礎(chǔ)，并有著廣袤的藥用資源。運用現(xiàn)代科技手段對中醫(yī)藥抗腫瘤的作用機制的研究也取得了斐然的成果，包括中藥在內(nèi)的天然藥物中的香豆素

2、、生物堿等化合物均被證實具有顯著而獨特的抗腫瘤活性。從中醫(yī)藥中尋找和挖掘高效、低毒、廣譜、廉價的抗腫瘤藥物，具有良好的前景，也是中醫(yī)藥工作者努力的方向。 第二部分中藥獨活抗腫瘤有效單體的提取、分離及其作用研究 目的：提取分離并鑒定中藥獨活中具有抗腫瘤活性的單體化合物；考察其活性單體的抗腫瘤作用及其機制。 方法：應(yīng)用硅膠柱色譜、重結(jié)晶及波譜分析等方法從中藥獨活的乙醇提取物中提取分離并鑒定其抗腫瘤活性單體物質(zhì)；運用四

3、甲基偶氮唑藍（MTT）法考察該單體化合物的體外抗腫瘤作用；運用MTT法和細胞克隆形成法考察該單體化合物對人胃癌細胞MKN28、MKN45的放射增敏作用；運用流式細胞術(shù)、熒光定量PCR等方法考察該化合物放射增敏的作用機制。 結(jié)果： 1.從中藥獨活乙醇提取物中共分離得到4個單體化合物，分別為甲氧基歐芹素、二十四烷酸、二氫歐山芹素、二氫歐山芹醇乙酸酯。其中甲氧基歐芹素為其抗腫瘤活性的主要物質(zhì)。 2.甲氧基歐芹素對不同組

4、織來源的10種人源腫瘤細胞均有較強的增殖抑制作用，IC50在17.35～34.40μg/ml。 3.甲氧基歐芹素10μg/ml預(yù)處理24h對人胃癌細胞系MKN28有放射增敏作用，其增敏比SERD0=1.137。而對MKN45細胞無增敏作用。 4.甲氧基歐芹素10μg/ml預(yù)處理24h后放射治療人胃癌MKN28細胞，可將細胞阻滯在G0/G1期，減少S期細胞比例；甲氧基歐芹素可增加放射誘導(dǎo)的細胞凋亡率，并提高放射引起的細胞內(nèi)

5、活性氧簇（ROS）的水平；放射處理后的極早期，甲氧基歐芹素可下調(diào)細胞BRCA1 mRNA的表達水平。 結(jié)論：甲氧基歐芹素是中藥獨活乙醇提取物抗腫瘤作用的主要活性物質(zhì)，體外具有較強的抑制腫瘤細胞增殖作用，并對人胃癌細胞MKN28有放射增敏作用，其作用機制可能與誘導(dǎo)細胞凋亡、改變細胞周期時相分布、提高細胞內(nèi)ROS水平以及下調(diào)DNA損傷修復(fù)相關(guān)基因BRCA1 mRNA表達水平下降有關(guān)。 第三部分中藥延胡索抗腫瘤有效部位的提取、

6、分離及其作用研究 目的：提取分離中藥延胡索中具有抗腫瘤作用的有效部位；考察該有效部位的抗腫瘤作用及其機制。 方法：應(yīng)用系統(tǒng)溶劑法中藥延胡索的乙醇提取物中提取分離其抗腫瘤活性部位；運用四甲基偶氮唑藍（MTT）法考察該有效部位的體外抗腫瘤作用；運用運用流式細胞術(shù)、熒光定量PCR等方法考察該化合物抗腫瘤的作用機制。 結(jié)果： 1.從中藥延胡索中提取分離出其主要抗腫瘤有效部位--延胡索總生物堿。 2.延胡索

7、總生物堿對不同組織來源的10種人源腫瘤細胞均有較強的增殖抑制作用，IC50在18.39～40.24μg/ml。 3.延胡索總生物堿可誘導(dǎo)人肝癌HepG2細胞凋亡，并將HepG2細胞阻滯在S期，有濃度和時間依賴性；IC50濃度延胡索總堿作用于人肝癌HepG2細胞24或48h后，15種miRNAs均被檢測到有不同程度的變化，其中尤以1et-7a表達的上調(diào)和miR-221、miR-222表達的下調(diào)較為突出。 結(jié)論：延胡索總生物