益生菌VSL#3對實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎大鼠的療效觀察及對STAT4-STAT6的影響.pdf

1、炎癥性腸病(inflammatory bowel disease，IBD)包括潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerativecolitis，UC)和克羅恩病(Crohn's disease，CD)。潰瘍性結(jié)腸炎是直腸和結(jié)腸的慢性非特異性炎癥，病因尚不清楚，病變主要累及粘膜和粘膜下層，腹痛腹瀉、粘液膿血便、消瘦及貧血等為其常見臨床表現(xiàn)，還可累及眼睛、皮膚等腸外組織和器官。病情輕重不等、反復(fù)發(fā)作，各年齡階段均可發(fā)病，給患者的身心和生活帶來麻煩痛苦。近幾

2、年多數(shù)學(xué)者專注UC的病因和發(fā)病機(jī)制的研究，希望能闡明病因從而找出治療潰瘍性結(jié)腸炎的最佳方法。許多學(xué)者認(rèn)為UC的發(fā)病是多種因素相互作用的結(jié)果，主要包括環(huán)境因素、遺傳因素、免疫因素、感染因素等。其中，環(huán)境因素作用于遺傳的易感者，在腸道菌群參與下，進(jìn)而啟動腸道免疫系統(tǒng)和非免疫系統(tǒng)，最后導(dǎo)致免疫反應(yīng)和炎癥的發(fā)生。免疫反應(yīng)發(fā)生時，粘膜T細(xì)胞功能異常在UC發(fā)病中起非常重要的作用，Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞均參與UC的發(fā)病過程，而信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子4

3、（STAT4）和6（STAT6）分別是介導(dǎo)Th1和Th2的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子之一，在維持Th1/Th2的平衡中起重要影響[1-2]。然而STAT4蛋白和STAT6蛋白在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病中的作用需要進(jìn)一步研究。除免疫因外，腸道菌群失調(diào)與潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病關(guān)系也是近幾年學(xué)者關(guān)注的熱點(diǎn)之一。許多研究表明，在UC患者中，大多數(shù)人存在腸道菌群失調(diào)，改善腸道菌群的比例或許是治療潰瘍性結(jié)腸炎的一種方法。目前臨床常用的治療潰瘍性結(jié)腸炎的益生菌制劑:乳酸桿菌、

4、雙歧三聯(lián)活菌及益生菌VSL＃3等，研究較多的益生菌是VSL＃3，VSL＃3是一種凍干的細(xì)菌合劑，每袋約含有9×1011個細(xì)菌，其中主要包括4株乳酸桿菌、3株雙歧桿菌和1株鏈球菌唾液嗜熱亞種。益生菌治療UC的作用機(jī)制目前仍在探討之中。我們采用5％DSS(dextran sulfate sodium)溶液誘導(dǎo)大鼠，制作臨床表現(xiàn)與UC相似的實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎模型，并通過給予大鼠引用美沙拉嗪和益生菌VSL＃3藥物溶液，檢測益生菌VSL＃3治療DSS誘

5、導(dǎo)的大鼠后，對STAT4和STAT6蛋白表達(dá)的影響，探討其治療實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的可能的作用機(jī)制。
　　目的：
　　觀察益生菌VSL＃3對DSS（dextran sulfate sodium，DSS）誘導(dǎo)的大鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的療效和對信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子STAT4/STAT6蛋白表達(dá)的影響，了解益生菌VSL＃3治療大鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的可能作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.4％多聚甲醛浸泡的組織做石蠟包埋、制片，做HE染色，

6、觀察各組大鼠結(jié)腸粘膜破損程度。重復(fù)包埋、制片，做免疫組化，檢測STAT4、STAT6在各組大鼠結(jié)腸粘膜的定性表達(dá)。-70℃冰箱冷凍保存的結(jié)腸標(biāo)本，提取蛋白，做Westernblot實(shí)驗(yàn)，檢測STAT4、STAT6在各組大鼠腸粘膜的定量表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　模型組大鼠組織病理損傷最重，明顯高于正常組、美沙拉嗪組和益生菌VSL＃3組（p均＜0.05）。與模型組比較，美沙拉嗪組和益生菌組大鼠腸粘膜組織破壞明顯減輕，破壞程度介于正