神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43在大鼠椎間盤(pán)炎癥模型中的表達(dá)及意義.pdf

1、許多研究證實(shí),椎間盤(pán)在退變過(guò)程中,可產(chǎn)生大量炎癥介質(zhì)及退變產(chǎn)物,誘導(dǎo)椎間盤(pán)內(nèi)部成炎癥狀態(tài).目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)盤(pán)源性下腰痛的研究多集中在此炎癥變化上,而對(duì)炎癥狀態(tài)下椎間盤(pán)內(nèi)部神經(jīng)纖維的長(zhǎng)入及其機(jī)制尚缺乏系統(tǒng)深入的研究.GAP-43是一種神經(jīng)特異性的磷蛋白,與神經(jīng)的生長(zhǎng)、發(fā)育和再生過(guò)程密切相關(guān).GAP-43通過(guò)引導(dǎo)軸突生長(zhǎng)和調(diào)節(jié)新連接形成而影響軸突的生長(zhǎng)能力,即使在缺乏其它營(yíng)養(yǎng)因子時(shí)也能使神經(jīng)元發(fā)出新的終末,所以GAP-43被認(rèn)為是神經(jīng)元生長(zhǎng)

2、期的內(nèi)在決定因子,可作為神經(jīng)再生的標(biāo)志.最近許多研究認(rèn)為,GAFL43和椎間盤(pán)退變時(shí)神經(jīng)纖維的長(zhǎng)入有密切的關(guān)系.因此通過(guò)研究椎間盤(pán)炎癥狀態(tài)下椎間盤(pán)及初級(jí)神經(jīng)元背根神經(jīng)節(jié)中GAP-43的表達(dá)變化,可以探索椎間盤(pán)炎癥環(huán)境下神經(jīng)長(zhǎng)入病變椎間盤(pán)的促進(jìn)因素,進(jìn)而探討椎間盤(pán)源性下腰痛的微觀分子機(jī)制,為椎間盤(pán)源性下腰痛尋找新的治療途徑,有著重要的意義. 本論文的內(nèi)容分以下三個(gè)部分: 第一部分:大鼠椎間盤(pán)炎癥模型的建立與觀察 目

3、的:用HE染色觀察大鼠椎間盤(pán)內(nèi)注射弗氏佐劑后不同時(shí)間椎間盤(pán)內(nèi)炎癥的變化情況. 方法:正常成年雄性S-D大鼠(n=17,200-250g),隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(n=12)、對(duì)照組(n=4)和空白對(duì)照組(n=1).實(shí)驗(yàn)組大鼠經(jīng)L5,6椎間盤(pán)腹側(cè)注射501μl弗氏佐劑,對(duì)照組注射50μl生理鹽水.術(shù)后1,3,7,14天分別將動(dòng)物處死,取L5,6椎間盤(pán),行石蠟包埋、切片,HE染色. 結(jié)論:大鼠椎間盤(pán)內(nèi)注射弗氏佐劑誘導(dǎo)了椎間盤(pán)內(nèi)的炎癥

4、狀態(tài). 第二部分:神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43在大鼠椎間盤(pán)炎癥模型中表達(dá)的熒光免疫組化研究 目的:用熒光免疫組化方法檢測(cè)椎間盤(pán)炎癥環(huán)境下椎間盤(pán)內(nèi)及背根神經(jīng)節(jié)中GAP-43在不同時(shí)期與對(duì)照組的表達(dá)變化. 方法:正常成年雄性S-D大鼠(n=61,200-250g),隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(n=24)、對(duì)照組(n=24)、注射N(xiāo)GF組(n=9)和空白對(duì)照組(n=4).在L5,6椎間盤(pán)應(yīng)用熒光金追蹤7天后,實(shí)驗(yàn)組椎間盤(pán)經(jīng)腹側(cè)注射50μl

5、弗氏佐劑,對(duì)照組注射50μl生理鹽水.術(shù)后1,3,7,14天分別處死,取T13-L6背根神經(jīng)節(jié)和L5,6椎間盤(pán),雙染NGF和CGRP;GAP-43和CGRP、IB4.注射N(xiāo)GF組在L5,6椎間盤(pán)應(yīng)用熒光金追蹤7天后,實(shí)驗(yàn)組椎間盤(pán)經(jīng)腹側(cè)分別注射301μl含1μg(n=3)和10μgNGF(n=3)的生理鹽水,對(duì)照組注射301μl生理鹽水(n=3),術(shù)后3天處死,取T13-L6背根神經(jīng)節(jié),行GAP-43的表達(dá)檢測(cè). 結(jié)論:椎間盤(pán)炎癥

6、狀態(tài)下刺激了炎癥局部NGF的高表達(dá);椎間盤(pán)炎癥環(huán)境刺激了椎間盤(pán)和DRG中GAP-43的高表達(dá),其高表達(dá)晚于NGF的高表達(dá);椎間盤(pán)內(nèi)注射不同劑量的NGF后GAP-43不同程度的上調(diào)證實(shí)了兩者可能存在相關(guān)性;GAP-43陽(yáng)性神經(jīng)元以中小神經(jīng)元為主,這些神經(jīng)元較大的神經(jīng)元更易長(zhǎng)入炎癥椎間盤(pán). 第三部分:神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43在大鼠椎間盤(pán)炎癥模型背根神經(jīng)節(jié)中mRNA水平的表達(dá)研究 目的:用原位雜交和RT-PCR檢測(cè)椎間盤(pán)炎癥環(huán)境下

7、大鼠背根神經(jīng)節(jié)中GAP-43mRNA在不同時(shí)期與對(duì)照組的表達(dá)變化. 方法:正常雄性S-D大鼠(n=51只,200-250g),隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(n=24,原位雜交和RT-PCR各半),對(duì)照組(n=24,原位雜交和RT-PCR各半),和空白對(duì)照組(n=3,RT-PCR)在實(shí)驗(yàn)組L5,6椎間盤(pán)腹側(cè)注射50m弗氏佐劑,對(duì)照組注射50μl生理鹽水.術(shù)后1,3,7,14天分別處死,取T13-L6背根神經(jīng)節(jié),分別行GAP-43的原位雜交和RT