神經(jīng)生長相關蛋白-43在大鼠椎間盤炎癥模型中的表達及意義.pdf

1、許多研究證實,椎間盤在退變過程中,可產(chǎn)生大量炎癥介質及退變產(chǎn)物,誘導椎間盤內部成炎癥狀態(tài).目前國內外學者對盤源性下腰痛的研究多集中在此炎癥變化上,而對炎癥狀態(tài)下椎間盤內部神經(jīng)纖維的長入及其機制尚缺乏系統(tǒng)深入的研究.GAP-43是一種神經(jīng)特異性的磷蛋白,與神經(jīng)的生長、發(fā)育和再生過程密切相關.GAP-43通過引導軸突生長和調節(jié)新連接形成而影響軸突的生長能力,即使在缺乏其它營養(yǎng)因子時也能使神經(jīng)元發(fā)出新的終末,所以GAP-43被認為是神經(jīng)元生長

2、期的內在決定因子,可作為神經(jīng)再生的標志.最近許多研究認為,GAFL43和椎間盤退變時神經(jīng)纖維的長入有密切的關系.因此通過研究椎間盤炎癥狀態(tài)下椎間盤及初級神經(jīng)元背根神經(jīng)節(jié)中GAP-43的表達變化,可以探索椎間盤炎癥環(huán)境下神經(jīng)長入病變椎間盤的促進因素,進而探討椎間盤源性下腰痛的微觀分子機制,為椎間盤源性下腰痛尋找新的治療途徑,有著重要的意義. 本論文的內容分以下三個部分: 第一部分:大鼠椎間盤炎癥模型的建立與觀察 目

3、的:用HE染色觀察大鼠椎間盤內注射弗氏佐劑后不同時間椎間盤內炎癥的變化情況. 方法:正常成年雄性S-D大鼠(n=17,200-250g),隨機分為實驗組(n=12)、對照組(n=4)和空白對照組(n=1).實驗組大鼠經(jīng)L5,6椎間盤腹側注射501μl弗氏佐劑,對照組注射50μl生理鹽水.術后1,3,7,14天分別將動物處死,取L5,6椎間盤,行石蠟包埋、切片,HE染色. 結論:大鼠椎間盤內注射弗氏佐劑誘導了椎間盤內的炎癥

4、狀態(tài). 第二部分:神經(jīng)生長相關蛋白43在大鼠椎間盤炎癥模型中表達的熒光免疫組化研究 目的:用熒光免疫組化方法檢測椎間盤炎癥環(huán)境下椎間盤內及背根神經(jīng)節(jié)中GAP-43在不同時期與對照組的表達變化. 方法:正常成年雄性S-D大鼠(n=61,200-250g),隨機分為實驗組(n=24)、對照組(n=24)、注射NGF組(n=9)和空白對照組(n=4).在L5,6椎間盤應用熒光金追蹤7天后,實驗組椎間盤經(jīng)腹側注射50μl

5、弗氏佐劑,對照組注射50μl生理鹽水.術后1,3,7,14天分別處死,取T13-L6背根神經(jīng)節(jié)和L5,6椎間盤,雙染NGF和CGRP;GAP-43和CGRP、IB4.注射NGF組在L5,6椎間盤應用熒光金追蹤7天后,實驗組椎間盤經(jīng)腹側分別注射301μl含1μg(n=3)和10μgNGF(n=3)的生理鹽水,對照組注射301μl生理鹽水(n=3),術后3天處死,取T13-L6背根神經(jīng)節(jié),行GAP-43的表達檢測. 結論:椎間盤炎癥

6、狀態(tài)下刺激了炎癥局部NGF的高表達;椎間盤炎癥環(huán)境刺激了椎間盤和DRG中GAP-43的高表達,其高表達晚于NGF的高表達;椎間盤內注射不同劑量的NGF后GAP-43不同程度的上調證實了兩者可能存在相關性;GAP-43陽性神經(jīng)元以中小神經(jīng)元為主,這些神經(jīng)元較大的神經(jīng)元更易長入炎癥椎間盤. 第三部分:神經(jīng)生長相關蛋白43在大鼠椎間盤炎癥模型背根神經(jīng)節(jié)中mRNA水平的表達研究 目的:用原位雜交和RT-PCR檢測椎間盤炎癥環(huán)境下

7、大鼠背根神經(jīng)節(jié)中GAP-43mRNA在不同時期與對照組的表達變化. 方法:正常雄性S-D大鼠(n=51只,200-250g),隨機分為實驗組(n=24,原位雜交和RT-PCR各半),對照組(n=24,原位雜交和RT-PCR各半),和空白對照組(n=3,RT-PCR)在實驗組L5,6椎間盤腹側注射50m弗氏佐劑,對照組注射50μl生理鹽水.術后1,3,7,14天分別處死,取T13-L6背根神經(jīng)節(jié),分別行GAP-43的原位雜交和RT