梅花鹿 IGFs基因的克隆與多態(tài)性分析.pdf

1、吉林省的梅花鹿飼養(yǎng)量歷來(lái)都位居全國(guó)之首，而我國(guó)飼養(yǎng)的梅花鹿主要以收茸為主，對(duì)于梅花鹿能否得到高產(chǎn)鹿茸一直倍受關(guān)注。吉林雙陽(yáng)地區(qū)的梅花鹿是我國(guó)最早繁育出的梅花鹿茸用新品種，其特點(diǎn)是耐粗飼，產(chǎn)茸量高，深受廣大養(yǎng)戶的喜愛。所以在以上優(yōu)點(diǎn)的基礎(chǔ)上，決定再?gòu)姆肿铀缴蠈?duì)雙陽(yáng)梅花鹿鹿茸的生長(zhǎng)繁育情況進(jìn)行研究，尋找出對(duì)其直接或間接作用的功能基因，并對(duì)梅花鹿的品種進(jìn)行改良，以達(dá)到獲得高產(chǎn)茸茸鹿的目的。
　　本試驗(yàn)對(duì)胰島素樣生長(zhǎng)因子 I（IGF-I

2、）及胰島素樣生長(zhǎng)因子 II（IGF-II）兩個(gè)胰島素樣生長(zhǎng)因子家族的多肽基因進(jìn)行研究。①采用PCR-SSCP技術(shù)分析了胰島素樣生長(zhǎng)因子 I基因(IGF-I)啟動(dòng)子區(qū)及外顯子2在吉林雙陽(yáng)梅花鹿群體中的遺傳多樣性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有5對(duì)引物存在多態(tài)性，對(duì) IGF-I基因多態(tài)片段進(jìn)行克隆、測(cè)序，確定多態(tài)位點(diǎn)的突變位置。進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，得到其基因型頻率、等位基因頻率并獲得優(yōu)勢(shì)基因型。對(duì)該基因上的微衛(wèi)星位點(diǎn) PM進(jìn)行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，對(duì)多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行

3、克隆、測(cè)序及數(shù)據(jù)分析。②因 Genbank中沒有梅花鹿IGF-II基因序列的全長(zhǎng)，所以為了更好的開展梅花鹿產(chǎn)茸性狀的研究，本試驗(yàn)采用 RACE的方法對(duì) IGF-II基因進(jìn)行擴(kuò)增，獲得了該基因的全長(zhǎng)并在 Genbank中登錄。③根據(jù)已克隆到的IGF-II基因的3'UTR序列設(shè)計(jì)引物進(jìn)行 PCR-SSCP，SSCP分析結(jié)果僅有一對(duì)引物出現(xiàn)多態(tài)性，對(duì)3'UTR基因多態(tài)片段進(jìn)行克隆、測(cè)序，確定多態(tài)位點(diǎn)的突變位置。進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，得到其基因型頻率、

4、等位基因頻率以及優(yōu)勢(shì)基因型。
　　試驗(yàn)結(jié)果表明①IGF-I基因啟動(dòng)子區(qū)的數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示，引物 P1共檢測(cè)到四種基因型 AA、AB、BB、CC，其中 BB為優(yōu)勢(shì)基因型；引物P2檢測(cè)到三種基因型 AA、AB和 BB，其中 AA為優(yōu)勢(shì)基因型；引物 P3共檢測(cè)到三種基因型 AC、BB、BC，其中 BB為優(yōu)勢(shì)基因型；引物 P4檢測(cè)到兩種基因型 AA和 AB，其中 AA為優(yōu)勢(shì)基因型；引物 P8檢測(cè)到兩種基因型 AA和 AB，其中 AA為優(yōu)勢(shì)

5、基因型。對(duì)該基因上的微衛(wèi)星位點(diǎn)PM進(jìn)行數(shù)據(jù)分析得到等位基因數(shù)及頻率 A：112(0.903)、B：129(0.097)及基因型頻率 AA：50(0.806)、AB：12(0.194)。②IGF-II基因的全長(zhǎng)已登錄到 Genbank中，因?yàn)榈玫饺龡l序列，將其全部提交到 Genbank上，登錄號(hào)分別為 IGF2V1：GU480023；IGF2V2：GU480024；IGF2V3：GU480025。③梅花鹿 IGF-II基因的3'UTR的數(shù)