梅花鹿粘膜病病毒的分離鑒定.pdf

1、該研究用吉林省某鹿場母鹿流產(chǎn)胎兒的肝臟病料,經(jīng)MDBK細(xì)胞適應(yīng)培養(yǎng),獲得一株病毒(命名為MDVCC-deer6).該分離毒能在MDBK細(xì)胞上形成有規(guī)律的病變,其病變形態(tài)與病變時(shí)間同標(biāo)準(zhǔn)株牛病毒性腹瀉-粘膜病病毒一致.電鏡負(fù)染觀察,病毒粒子呈典型粘膜病病毒形態(tài).血凝試驗(yàn)表明,該病毒對(duì)雞、兔、豬和綿羊的紅細(xì)胞均無血凝性;毒力測定,該病毒的TCID50為10-5.5.理化學(xué)研究表明,該病毒對(duì)氯仿、乙醚敏感;胰酶試驗(yàn)中,經(jīng)37℃,1小時(shí)處理的病

2、毒,仍然能夠在MDBK細(xì)胞上生長,但毒力下降3.2個(gè)滴度.耐酸性試驗(yàn)中,病毒在pH3.0經(jīng)37℃作用1小時(shí),毒力下降4.4個(gè)滴度;耐堿性試驗(yàn)中,病毒在pH9.0經(jīng)37℃作用1小時(shí),毒力下降0.4個(gè)滴度.耐熱性試驗(yàn)中,該病毒在恒定溫度50℃,設(shè)定不同時(shí)間,從30分鐘到7 0分鐘,毒力均有不同程度下降.其中,5 0℃作用30分鐘,病毒平均下降0.6個(gè)滴度;50℃,70分鐘,病毒平均下降3.7個(gè)滴度;恒定溫度56℃,設(shè)定不同時(shí)間,從30分鐘到

3、70分鐘,毒力也均有不同程度下降.其中,56℃作用30分鐘,病毒平均下降2個(gè)滴度;56℃,70分鐘,病毒完全滅活.中和試驗(yàn)表明,粘膜病病毒特異陽性血清能完全中和該分離毒.綜上實(shí)驗(yàn)結(jié)果,可初步確定該分離毒屬于粘膜病病毒.分子生物學(xué)鑒定方面,選用MDV標(biāo)準(zhǔn)株的高度保守的P125區(qū)序列設(shè)計(jì)引物.合成該引物,選擇梅花鹿母鹿的流產(chǎn)胎兒肝組織原代病料和該分離毒的各代細(xì)胞培養(yǎng)物,均成功地?cái)U(kuò)增出了約400bp目的片段,與國際標(biāo)準(zhǔn)毒株一致,而未接毒MDB