鵝A-FABP基因克隆與多態(tài)性分析.pdf

1、脂肪型脂肪酸結(jié)合蛋白(Adipocyte Fatty Acid-Binding Proteins，A-FABP)是脂肪酸結(jié)合蛋白中的重要因子，在哺乳動(dòng)物中只在脂肪組織中表達(dá)。哺乳動(dòng)物的A-FABP是甘油三酯的貯存庫，在甘油三酯的形成以及脂溶解的過程中A-FABP儲(chǔ)存或釋放出大量的脂肪酸，還具有調(diào)節(jié)作用：影響細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因轉(zhuǎn)錄；改變細(xì)胞內(nèi)氧化還原電位；改變細(xì)胞內(nèi)與代謝相關(guān)的酶的活性；增加脂肪酸在膜間的擴(kuò)散，從而參與調(diào)控脂生成及溶解的

2、生化循環(huán)。 本試驗(yàn)以五龍鵝和朗德鵝為研究對(duì)象，克隆了A-FABP基因內(nèi)含子2和3的完整序列，并用3種不同的酶酶切PCR產(chǎn)物，與鵝的肥肝性能進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)其內(nèi)含子3的序列進(jìn)行同源性分析和酶切分析，并利用Real-time PCR技術(shù)檢測了A-FABP基因在脂肪、肝、腿肌等10種組織中的表達(dá)情況。結(jié)果如下： 1.根據(jù)雞(AF432506)、鴨(DQ358123)、人(NM001442)、豬(SSY16039)等的A.FAB

3、P基因保守序列設(shè)計(jì)引物，運(yùn)用PCR法從五龍鵝和朗德鵝血液中克隆了A-FABP基因內(nèi)含子2序列，長461bp(GenBank登錄號(hào)為DQ647701)。并用RFLP的方法對(duì)其進(jìn)行遺傳多態(tài)性研究，該擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)Asp Ⅰ、Hinf Ⅰ和HaeⅢ酶切后，發(fā)現(xiàn)有HaeⅢ-RFLP，并出現(xiàn)AA、AB和BB 3種基因型，其五龍鵝和朗德鵝的基因型頻率分別為0.7、02、0.1與0.372、0.465、0.1 63。經(jīng)X<'2>檢驗(yàn)，五龍鵝和朗德鵝在A-

4、FABP位點(diǎn)上處于Hardy-wleinberg平衡狀態(tài)(P>0.05)。分析基因型與鵝體重和肥肝性狀時(shí)發(fā)現(xiàn)：基因型對(duì)五龍鵝體重?zé)o顯著影響(P>0.05)，而對(duì)填飼的朗德鵝體重和肥肝性狀有顯著影響(P<0.05)。填飼的朗德鵝在體重和肥肝性狀上基因型AA與AB和BB之間存在顯著差異(P<0.05)，而五龍鵝在體重性狀上3種基因型差異不顯著(P>0.05)。在研究指標(biāo)中兩種鵝的AA基因型效應(yīng)均大于AB和BB基因型。表明，這些差異的不同可能

5、反映了品種之間不同的遺傳特性。A-FIABP可能是影響鵝肥肝性狀的主效基因或與主效基因相連鎖，可用于更多鵝肥肝性狀的標(biāo)記輔助選擇。 2.根據(jù)雞的(AF432506)、鴨(DQ358123)等發(fā)表的編碼區(qū)序列設(shè)計(jì)兼并引物，從五龍鵝和朗德鵝基因組的DNA中克隆了包括內(nèi)含子3的序列，長1361bp(序列已提交GenBank)，其中完整的內(nèi)含子3長1278bp。鵝A-FABP基因內(nèi)含子3與雞的同源性達(dá)到了75.0％。獲得的序列與雞相比發(fā)

6、生了60個(gè)堿基缺失和274個(gè)堿基替換，雞相對(duì)鵝發(fā)生了51個(gè)堿基缺失和283個(gè)堿基替換。通過對(duì)鵝A-FABP基因內(nèi)含子3的基因組序列進(jìn)行酶切分析發(fā)現(xiàn)有10種常見的限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)20處，并且用分析軟件表明該片斷適合進(jìn)行酶切分析。 3.根據(jù)已測得的不同動(dòng)物A-FABP基因的保守區(qū)設(shè)計(jì)引物，提取朗德鵝脂肪、肝、心、脾、肺、腎、胸肌、腿肌、睪丸、腦10種組織的RNA，利用Real-time PcR技術(shù)檢測了A-FABP基因在10種