白介素-23和白介素-21在支氣管哮喘氣道炎癥中的作用研究.pdf

1、第一部分支氣管哮喘小鼠模型的建立以及不同激發(fā)方式對氣道炎癥的影響
　　目的：探討滴鼻和霧化兩種不同代表性激發(fā)方式對小鼠支氣管哮喘模型氣道炎癥的影響，為研究和優(yōu)化支氣管哮喘動物模型提供理論依據(jù)。
　　方法：選擇6-8周齡雌性BALB/c小鼠采用雞卵清蛋白（OVA）進行致敏，分別采用滴鼻和霧化兩種不同方式進行激發(fā)，復制哮喘模型，觀察支氣管肺泡灌洗液（BALF）中白細胞總數(shù)和細胞分類計數(shù)，采用ELISA方法檢測BALF上清中IL-

2、4、IL-13含量，常規(guī)病理切片HE染色觀察肺內炎癥情況。
　　結果：滴鼻組小鼠BALF中白細胞總數(shù)最高，其次為霧化組小鼠；且滴鼻組小鼠嗜酸性粒細胞總數(shù)及中性粒細胞總數(shù)亦明顯高于霧化組與正常組，差異比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。滴鼻組小鼠BALF中IL-4、IL-13水平明顯高于霧化組與正常組小鼠，差異比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；霧化組小鼠BALF中IL-4、IL-13水平高于正常組小鼠，差異比較有統(tǒng)計學意義(P<0.0

3、5)。滴鼻組肺組織炎癥最明顯，可見上皮細胞破壞，杯狀細胞增生，支氣管和血管周圍有大量炎癥細胞浸潤，以嗜酸性粒細胞和淋巴細胞為主。霧化吸入組炎癥程度較輕，正常對照組無明顯炎癥改變。
　　結論：霧化吸入和經(jīng)鼻滴入的激發(fā)方式都可以成功制作出支氣管哮喘模型，經(jīng)鼻滴入方式可以引起肺部更加明顯的炎癥浸潤及細胞因子表達，為哮喘研究提供更好的選擇。
　　第二部分阻斷IL-23通路通過降低Tc17細胞浸潤改善支氣管哮喘小鼠肺部炎癥
　　

4、目的：Tc17細胞是產(chǎn)生IL-17的CD8+ T細胞，并被發(fā)現(xiàn)參與過敏性哮喘的發(fā)病。IL-23通過調控Th17細胞參與IL-17相關炎癥反應。本部分研究探討IL-23是否對Tc17細胞也有免疫調控作用。
　　方法：6-8周齡雌性BALB/c小鼠根據(jù)致敏/激發(fā)/干預的不同分為4組：1）陰性對照組，2）哮喘組，3）IL-23中和抗體干預組，4）同型對照抗體干預組。IL-23中和抗體和同型對照抗體在激發(fā)前氣道內給予。氣道反應性通過 Fl

5、exiVent小鼠肺功能儀測定。觀察支氣管肺泡灌洗液中白細胞總數(shù)和分類計數(shù)，肺組織炎癥和粘液分泌分別通過 HE染色和PAS染色進行觀察。制作肺組織單細胞懸液，用流式細胞術檢測Tc17/Th17細胞浸潤，ELISA方法檢測肺組織勻漿IL-17水平。
　　結果：IL-23中和抗體干預后降低了哮喘小鼠氣道高反應性、BALF中白細胞總數(shù)和嗜酸性粒細胞、中性粒細胞。IL-23抗體干預也降低了肺組織Th17和Tc17細胞浸潤比例以及IL-17

6、水平。
　　結論：作為IL-23/Th17細胞軸的補充，IL-23/Tc17細胞軸也參與支氣管哮喘的發(fā)病。
　　第三部分 IL-21對支氣管哮喘氣道炎癥的影響研究
　　目的：細胞因子，尤其是Th2型細胞因子IL-4、IL-5和IL-13已經(jīng)證實在支氣管哮喘發(fā)病中起重要作用。IL-21對免疫系統(tǒng)有重要作用，但在過敏性疾病發(fā)展中的作用目前研究中尚有不一致之處。本部分研究以在體干預方式探討IL-21對支氣管哮喘氣道炎癥的影響

7、。
　　方法：使用卵清蛋白OVA誘導的小鼠支氣管哮喘模型，通過ELISA方法檢測其肺泡灌洗液（BALF）中IL-21濃度。比較正常對照組、哮喘組及IL-21干預組之間的BALF細胞學、肺組織病理學及血漿IgE水平。OVA誘導的過敏性鼻炎及IL-21干預作為陽性對照，比較IL-21對嗜酸性粒細胞鼻粘膜浸潤的影響。
　　結果：哮喘組小鼠BALF中IL-21濃度低于正常對照組。哮喘組和IL-21干預組在BALF細胞學、肺組織病理學