應(yīng)用16S rRNA基因序列分析技術(shù)鑒定臨床非典型細(xì)菌.pdf

1、目的:將16S rRNA基因序列分析技術(shù)應(yīng)用于微生物實(shí)驗(yàn)室傳統(tǒng)方法鑒定可靠率低或無(wú)法鑒定的15株實(shí)驗(yàn)細(xì)菌，作為細(xì)菌常規(guī)鑒定手段的必要補(bǔ)充。
　　 方法:選擇該院臨床微生物實(shí)驗(yàn)室保存的5株標(biāo)準(zhǔn)菌株驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性后，收集實(shí)驗(yàn)室常規(guī)方法不能準(zhǔn)確鑒定的實(shí)驗(yàn)細(xì)菌15株（涵蓋革蘭陽(yáng)性球菌，革蘭陽(yáng)性桿菌及革蘭陰性桿菌），提取DN模板，通用引物PCR擴(kuò)增16S rRNA基因片段，擴(kuò)增產(chǎn)物由華大基因測(cè)序公司測(cè)序，將16S rRNA基因序列與

2、GENBANK數(shù)據(jù)庫(kù)中16S rRNA序列進(jìn)行同源比對(duì)分析后，把16S rRNA序列同源性在95％～99％之間定義為同屬細(xì)菌，大于等于99％則定義為同種細(xì)菌。
　　 結(jié)果:在15株實(shí)驗(yàn)細(xì)菌中，有14株菌(93.3％)的16S rRNA基因序列與GENBANK數(shù)據(jù)庫(kù)16S rRNA序列同源性達(dá)99％以上，成功鑒定到種的水平，包括鼻疽諾卡菌，大腸埃希菌，阿爾萊特葡萄球菌，脆弱擬桿菌，弗氏檸檬酸桿菌，短小芽孢桿菌，河流漫游球菌，極小短