雌性激素受體ER與PGR基因在經(jīng)前期綜合征模型動(dòng)物下丘腦中的表達(dá)研究.pdf

1、經(jīng)前期綜合征(Premenstrual Syndrome，PMS)，是指一組反復(fù)發(fā)生在經(jīng)前，影響婦女日常生活和工作，涉及軀體和精神兩方面的癥候群。PMS是育齡婦女發(fā)病率較高的疾病之一，在20～40歲之間的女性最為普遍。但由于采用的診斷標(biāo)準(zhǔn)和個(gè)體反應(yīng)性的不同，其發(fā)病率差異很大，據(jù)估計(jì)育齡婦女中約90﹪至少有一種PMS癥狀，而大約有20～40﹪的婦女正常生活會(huì)到影響。PMS的病因及發(fā)病機(jī)制目前仍不明確，多數(shù)學(xué)者研究認(rèn)為，中樞神經(jīng)系統(tǒng)和其它靶

2、組織器官出現(xiàn)的PMS癥狀，可能是由于正常卵巢排卵引發(fā)的一系列復(fù)雜的神經(jīng)內(nèi)分泌反應(yīng)的結(jié)果。近年來(lái)，有關(guān)PMS病因和病理生理的研究涉及環(huán)境、內(nèi)分泌系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)之間的相互作用以及遺傳因素。目前比較集中的一個(gè)研究方向是雌激素和孕激素在中樞神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的作用。與研究地日漸透徹的雌性激素在PMS發(fā)病中的作用相比，目前關(guān)于其中樞神經(jīng)系統(tǒng)受體在PMS發(fā)病過(guò)程中的表達(dá)情況卻仍就缺乏充足的研究。 本論文的研究?jī)?nèi)容是作為PMS肝氣逆證模型

3、動(dòng)物發(fā)病分子機(jī)理研究的一個(gè)部分，以PMS模型獼猴和大鼠為對(duì)象，將PMS發(fā)病與下丘腦內(nèi)雌性激素受體的表達(dá)情況聯(lián)系起來(lái)，探究PMS實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型下丘腦中雌性激素受體的表達(dá)情況，為探明雌性激素及其受體在PMG發(fā)病中的作用機(jī)理提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 首先提取獼猴下丘腦總RNA，反轉(zhuǎn)錄獲得總cDNA，參照已報(bào)道的獼猴ERa、ERB、PGR基因設(shè)計(jì)引物，利用巢式PCR的方法擴(kuò)增得到上述受體基因，構(gòu)建載體質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化大腸桿菌培養(yǎng)擴(kuò)增；以質(zhì)粒載體所含目的基

4、因片段為模板體外轉(zhuǎn)錄制備地高辛探針標(biāo)記ERa、ERB、PGR基因的cRNA探針，組織切片原位雜交分析ERa mRNA、ERB mRNA、PGR mRNA在PMS模型獼猴下丘腦和正常獼猴下丘腦中的表達(dá)差異：同時(shí)，采用免疫組織化學(xué)分析ERB蛋白在PMS模型獼猴下丘腦和正常獼猴下丘腦中的表達(dá)情況：并且使用simplePCI軟件分析對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果顯示，ERa mRNA、ERB mRNA在PMS模型獼猴下丘腦中轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)相對(duì)其在

5、正常獼猴下丘腦中的表達(dá)均出現(xiàn)下調(diào)；ERB蛋白在PMS模型獼猴下丘腦中的表達(dá)相對(duì)其在正常獼猴下丘腦中的表達(dá)亦出現(xiàn)下調(diào)現(xiàn)象：PGR mRNA在PMS模型獼猴下丘腦中轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)相對(duì)其在正常獼猴下丘腦中的表達(dá)出現(xiàn)上調(diào)。 大鼠實(shí)驗(yàn)方面，利用雌性性成熟wistar大鼠構(gòu)建PMS肝氣逆證模型，以與獼猴實(shí)驗(yàn)類(lèi)似的實(shí)驗(yàn)方法路線(xiàn)研究ERa mRNA、ERβ mRNA、PGR mRNA和ERβ蛋白在PMS模型大鼠下丘腦與正常大鼠下丘腦內(nèi)的表達(dá)差異

6、；同時(shí)，提取PMS模型大鼠下丘腦和正常大鼠下丘腦總RNA進(jìn)行RT-PCR分析。結(jié)果顯示ERamRNA、ERβ mRNA在PMS模型大鼠下丘腦相對(duì)正常大鼠下丘腦內(nèi)的表達(dá)水平均出現(xiàn)下調(diào)；PGR mRNA在PMS模型大鼠下丘腦相對(duì)正常大鼠下丘腦內(nèi)的表達(dá)水平出現(xiàn)上調(diào)。 我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，PMS獼猴和PMS大鼠下丘腦內(nèi)雌激素受體表達(dá)出現(xiàn)下調(diào)而孕酮受體表達(dá)出現(xiàn)上調(diào)，我們認(rèn)為這可能對(duì)雌性激素與下丘腦內(nèi)其它激素和遞質(zhì)相互作用起到了弱化作用，涉