WT1基因在骨髓增生異常綜合征患者中的表達研究.pdf

1、目的1.利用FQ-RT-PCR檢測RA、RAEB、RAEBt的WT1表達水平的變化；2.通過回顧性分析，觀察RA患者發(fā)病初期的WT1表達情況；3.在個體化水平觀察MDS患者從RA演變到RAEB、RAEBt甚至白血病時，WT1表達水平的變化。探討WT1基因在MDS診斷和預后判斷中的意義。 方法1.回顧性分析山西醫(yī)科大學第二醫(yī)院從2000年至2003年的病例。按FAB標準選取MDS患者45例。其中男24例、女21例、中位年齡43歲，

2、包括RA患者18例、RAEB16例、RAEBt11例；18例RA中，有13例回顧診斷的RA，未經過治療；儲存三年以上的正常人骨髓涂片10例作為對照，其中男3例，女7例，中位年齡40歲；按照WHO診斷標準對RA重新分型，6例難治性貧血(WHO-RA)、12例難治性血細胞減少伴有多系發(fā)育異常(RCMD)。2.采用骨髓涂片提取RNA，通過熒光定量RT-PCR方法，對其WT1表達水平進行檢測，以β-actin表達作為內對照，WT1/β-acti

3、n比值作為WT1的相對表達量。3.實驗數據用spss軟件進行統計學分析。 結果1.正常人骨髓涂片WT1的相對表達量為2.75×10-6±20.0，RA組為3.87×10-5±30.2，RAEB組為1.06×10-3±4.707，RAEBt組為1.35×10-2±6.100，兩兩相比有顯著性差異，且WT1基因的表達水平與MDS病人的疾病進展呈正相關關系。2.WT1與MDS患者的原始細胞百分數之間有顯著相關性(Spearman's相

4、關分析，r=0.64)。3.回顧診斷的RA，其WT1表達水平顯著高于正常對照組。4.回顧分析RA的疾病進展過程，半年內發(fā)展為RAEB/RAEBt的RA患者，其WT1表達明顯高于半年內病情穩(wěn)定的RA患者；同一患者從RA發(fā)展到RAEB時，WT1表達水平增長一個對數級以上；在RA期間，WT1表達水平的波動小于一個對數級。5.WHO分型中，RCMD組的WT1轉錄水平(1.73×10-4)明顯高于WHO-RA(1.92×10-6，P＜0.05)。

5、 結論1.儲存骨髓涂片可以提取RNA，通過熒光定量RT-PCR方法檢測WT1基因，為疾病的回顧性研究提供了新的檢測方法。2.WT1基因可作為MDS疾病進程的標志物。3.對形態(tài)學未明確診斷而臨床高度懷疑MDS的患者，若WTI表達水平比正常對照平均值高兩個對數級提示可能診斷為RA：對RA患者，若WT1表達水平＞1個對數級的上升提示MDS近期內可能發(fā)生疾病進展。由于例數有限，尚有待進一步證實。4.WHO分型中，RCMD與WHO-RA的