5-羥色胺1A、2A受體基因在經(jīng)前期綜合癥獼猴模型下丘腦中的表達(dá)研究.pdf

1、經(jīng)前期綜合癥是指婦女在經(jīng)前期表現(xiàn)出的一系列生理和情感方面的不適癥狀，主要表現(xiàn)為煩躁易怒、失眠、緊張、壓抑以及頭痛、乳房腫脹等，嚴(yán)重者可影響婦女的正常生活。育齡婦女PMS發(fā)病率雖由于采用不同診斷標(biāo)準(zhǔn)和方法而異，但普遍認(rèn)為75-95％孕齡婦女有輕微癥狀，20％-40％左右達(dá)到診斷標(biāo)準(zhǔn)，2-15％可診斷為重癥患者，其造成的社會(huì)負(fù)擔(dān)相當(dāng)于抑郁癥。該病的發(fā)病率較高，至今對(duì)于其發(fā)病的具體機(jī)理尚不清楚。 本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建了PMS疾病獼猴與正

2、常獼猴大腦邊緣系統(tǒng)的差減cDNA文庫，篩選出與PMS疾病相關(guān)的基因，尤其是與PMS有關(guān)的一些神經(jīng)遞質(zhì)、性激素受體的特異性表達(dá)的基因，包括γ-氨基丁酸受體基因、5羥色胺1A、2A受體基因等。Blast同源性分析發(fā)現(xiàn)獼猴與人5-HT<,lA>、5-HT<,2A>受體基因的有很高的同源性。但是，在差減cDNA文庫中并未篩選出文獻(xiàn)中報(bào)道的與PMS相關(guān)的其他一些關(guān)鍵受體基因。以PMS獼猴模型為研究對(duì)象，取其大腦邊緣系統(tǒng)組織，提取總RNA并純化。按

3、照已報(bào)道的PGR、ER-α、ER—β基因設(shè)計(jì)引物，運(yùn)用RT-PCR技術(shù)，擴(kuò)增上述關(guān)鍵受體基因。本試驗(yàn)采用地高辛探針標(biāo)記從差減cDNA文庫中篩選得到的5-HT<,lA>、5-HT<,2A>受體基因片段，通過組織切片原位雜交分析5-HT<,lA>、5-HT<,2A>受體在PMS獼猴模型和正常獼猴下丘腦中的表達(dá)情況，并且使用simplePCI軟件分析對(duì)其定量分析，結(jié)果顯示，5-HT<,IA>、5-HT<,2A>受體基因在PMS模型獼猴下丘腦中

4、轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)上升。同時(shí)，采用半定量點(diǎn)雜交的方法分析5-HT<,lA>、5-HT<,2A>受體在PMS獼猴模型和正常獼猴下丘腦中的表達(dá)情況，兩者結(jié)果一致，即5-HT<,iA>、5-HT<,2A>受體基因在PMS模型獼猴下丘腦中轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)上升。 為了進(jìn)。步確認(rèn)從獼猴差減cDNA文庫中篩選到的PMS相關(guān)基因，以大鼠作為材料，建立疾病模型，分別取PMS造模大鼠和正常大鼠大腦邊緣系統(tǒng)作為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，將實(shí)驗(yàn)組定義為Teste

5、r，對(duì)照組定義為Driver，構(gòu)建正向差減cDNA文庫；將對(duì)照組定義為Tester，實(shí)驗(yàn)組定義為Driver，構(gòu)建反向差減cDNA文庫。提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄分別得到PMS造模大鼠與正常大鼠cDNA后，以RsaI酶切Tester與Driver成平端短片段cDNA。將Tester分成兩等份，連接上不同的接頭，Driver則不與接頭相連。將Tester與Driver進(jìn)行兩輪差減雜交后，通過抑制性PCR擴(kuò)增差異表達(dá)的序列。隨后將PCR產(chǎn)物與T載