FISH技術在骨髓增生異常綜合征中的應用與PRAME基因在骨髓增生異常綜合征的表達.pdf

1、第一部分、FISH技術在骨髓增生異常綜合征中的應用
　　 研究背景：克隆性染色體異常是診斷骨髓增生異常綜合征(MDS)的主要依據(jù)之一。同常規(guī)細胞遺傳學顯帶分析(CC)不同，熒光原位雜交技術(FISH)不需要細胞培養(yǎng)，利用位點特異性基因探針可以檢測間期細胞的克隆性染色體改變，并可以檢測出10-20％左右核型正常的MDS的異?？寺　肍ISH技術，可以提高MDS患者染色體異常檢出率，為診斷和治療提供幫助。
　　 目的：本研

2、究對MDS患者進行常規(guī)細胞遺傳學顯帶分析(CC)和FISH檢測，建立在MDS診斷過程中的規(guī)范化的FISH檢測平臺；比較FISH與常規(guī)細胞遺傳學方法在檢測MDS染色體異?？寺≈械牟町?，探討FISH在MDS診斷中的地位。
　　 方法：對符合維也納最低診斷標準的MDS患者進行常規(guī)細胞遺傳學顯帶分析(CC)和FISH檢測，并搜集患者一般臨床資料。
　　 結(jié)果：1．成功建立包括-5/5q-，+8，-7/7q-，20q-，-Y探針組

3、合的FISH診斷MDS的檢測平臺，成功率100%。
　　 2．北京協(xié)和醫(yī)院確診的83例MDS中，兩種方法總的染色體異常檢出率42.2%，其中CC法檢出率30.1%，F(xiàn)ISH陽性率33.7%，兩種方法的符合率為76.1%。
　　 3．FISH法較CC法在FAB亞型RA組患者檢出率更高(30.7%VS24.6%，P=0.000)，而在FAB其他組及WHO分型各亞組染色體異常檢出率類似。
　　 4．在IPSS分組中，F(xiàn)

4、ISH法能提高中危1組的檢出率(29.6%VS10%，P=0.049)，而對中危2患者CC法檢出率更高(81.2%VS62.5%，P=0.036)。
　　 5．CC法檢測正?；蚴』颊咧?，有11例(19%)患者FISH法檢測陽性，其FAB分型以RA患者為主9例(81.8%);IPSS分組以中危1為主10例(90.9%)。
　　 6．用FISH法與CC法分別進行IPSS分組，發(fā)現(xiàn)用兩種方法評價IPSS吻合率為86.7%。單

5、純用CC法結(jié)果進行IPSS分組將導致3例患者(3.6%)危險分級下滑，而單純FISH法結(jié)果進行IPSS分組將導致8例患者(9.6%)危險分級下滑。
　　 7．兩種方法檢出的染色體異常35例(42.2%)，復雜核型13例(15.7%)，單一異常核型22例(26.5%)。最常見的染色體異常為+8，共9例，占10.8%，其次為7號染色體的異常，共7例，占8.4%。
　　 結(jié)論：成功建立FISH技術在骨髓增生異常綜合征染色體異常

6、的檢測平臺，方法穩(wěn)定、靈敏、快速。FISH技術聯(lián)合CC技術，可提高骨髓增生異常綜合征患者染色體異常的檢出率。相比CC技術，F(xiàn)ISH技術可以提高FAB分型RA組與IPSS分組中危1患者染色體異常的檢出率。FISH技術因包含探針有限，不能完全替代CC法在骨髓增生異常綜合征檢測中的作用，但可以相互補充。
　　 第二部分、PRAME基因(PreferentiallyExpressedAntigenofMelanoma)在MDS的表達及意

7、義
　　 研究背景：黑色素瘤優(yōu)先表達基因(PreferentiallyExpressedAntigenofMelanoma)是一種腫瘤相關抗原，廣泛在實體瘤以及急慢性白血病中高表達，可用來作為微小殘留病MRD的監(jiān)測，并用來預測療效。目前國內(nèi)外尚沒有研究其在MDS中的表達情況。
　　 目的：本研究檢測PRAME基因在MDS中的表達情況，探討PRAME基因表達在MDS診斷和預后判斷的意義。
　　 方法：采用實時定量P

8、CR的方法檢測66例符合維也納最低標準的MDS患者中PRAME基因的表達情況，以13例非造血系統(tǒng)腫瘤患者作為陰性對照，以K562細胞作為陽性對照。
　　 結(jié)果：1．MDS患者PRAME基因相對表達量的中位數(shù)為1.6×10-4(0-8.0)，明顯高于非造血系統(tǒng)腫瘤患者5.3×10-6(0-2.8×10-4)，p＜0.001。13例(20%)的MDS患者PRAME基因表達陽性，其中RA組陽性患者8例，陽性率17%，RAS組患者1例，

9、陽性率14%，RAEB組患者4例，陽性率33%。
　　 2．FAB分型、WHO分型、以及IPSS各亞組患者PRAME陽性率及表達水平無顯著差異。
　　 3．PRAME基因相對表達量與骨髓中原粒細胞比例呈正相關，r=0.244，P=0.034。
　　 4．骨髓形態(tài)中出現(xiàn)小巨核細胞的患者PRAME基因表達的陽性率更高，P=0.030.
　　 5．兩例隨診患者PRAME基因的表達量變化與臨床病情轉(zhuǎn)化相一致。