牛Ⅰ型肽載體（BPepT1）的克隆及在消化道組織中的表達(dá)分析.pdf

1、小肽是蛋白質(zhì)的重要消化吸收形式的觀點(diǎn)已經(jīng)被廣泛接受。在饑餓及某些病理狀態(tài)下，消化道對(duì)游離氨基酸吸收能力減弱或者喪失，以肽結(jié)合的形式可以使這些氨基酸得到很好的吸收。小肽的消化道吸收形式包括滲透擴(kuò)散、中間載體轉(zhuǎn)運(yùn)和通道穿透吸收三種，其中間載體轉(zhuǎn)運(yùn)吸收的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)與游離氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)不同，與游離氨基酸的吸收相比，小肽的吸收具有速度快、耗能低、不易飽和等特點(diǎn)。已知的肽載體有兩類：PepT1和PepT2，它們?cè)诠δ堋⒔Y(jié)構(gòu)和分布上完全不同。PepT

2、1主要分布在消化道，在小肽的消化道吸收中起著重要作用；PepT2主要分布在腎臟，這可能意味著腎臟能夠重吸收未被機(jī)體充分利用的小肽。兔、人、大鼠、羊PepT1均已被克隆，但對(duì)牛的PepT1研究很少，其序列還不清楚。 本試驗(yàn)根據(jù)Genebank上登錄的人、鼠、兔、羊的核苷酸序列設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增牛PepT1的部分編碼區(qū)，并進(jìn)行克隆測(cè)序。用熒光實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法來(lái)研究牛BPepT1在消化道組織中表達(dá)水平。結(jié)果如下： 1.本試

3、驗(yàn)采用RT-PCR的方法擴(kuò)增牛PepT1的部分編碼區(qū)并進(jìn)行克隆測(cè)序(登錄號(hào)為：DQ309694)。該片段大小為1566bp，經(jīng)比對(duì)該片斷是第3結(jié)構(gòu)域—第10結(jié)構(gòu)域之間的片斷，與人、鼠、兔、羊、狗、雞、豬核苷酸的同源性分別為82.89％、80.14％、78.93％、96.04％、83.08％、63.90％、85.66％，氨基酸同源性分別為81.45％、79.62％、76.25％、94.06％、81.49％、61.41％、83.56％。牛、

4、人、鼠、兔、羊、狗、雞、豬各結(jié)構(gòu)域的氨基酸同源性非常高，均在90％以上。牛、人、鼠、兔、羊、狗、雞、豬之間，3-4結(jié)構(gòu)域之間的氨基酸同源性為77.63％，4-5結(jié)構(gòu)域之間的氨基酸同源性為98.86％，5-6結(jié)構(gòu)域之間的氨基酸同源性為86.72％，6-7結(jié)構(gòu)域之間的氨基酸同源性為90.13％，7-8結(jié)構(gòu)域之間的氨基酸同源性為91.67％，8-9結(jié)構(gòu)域之間的氨基酸同源性為88.33％，9-10結(jié)構(gòu)域之間的氨基酸同源性為71.74％。9-10

5、結(jié)構(gòu)域之間的序列位于細(xì)胞外，對(duì)于肽的吸收比較重要，牛PepT19-10結(jié)構(gòu)域之間的氨基酸序列與大鼠、狗、雞、人、兔子、豬、羊相應(yīng)序列的同源性依次為65.17％、71.64％、29.38％、67.16％、60.20％、73.13％、88.56％。 2.在整段消化道中，BPepT1的表達(dá)量由高到低依次為回腸、空腸、瓣胃、瘤胃十二指腸、網(wǎng)胃、皺胃、盲腸、結(jié)腸。各段消化道的BPepT1表達(dá)水平差異極顯著(P＜0.01)。瓣胃的BPepT

6、1表達(dá)量與瘤胃差異不顯著，與網(wǎng)胃(P＜0.05)差異顯著，與皺胃(P＜0.01)差異極顯著；瘤胃BPepT1的表達(dá)量有高于網(wǎng)胃(0.05＜P＜0.15)和皺胃(0.05＜P＜0.15)的趨勢(shì)?；啬cBPepT1的表達(dá)量與空腸差異不顯著，回腸和空腸BPepT1的表達(dá)量均顯著高于十二指腸(P＜0.05)、盲腸(P＜0.05)和結(jié)腸(P＜0.05)?；啬c和空腸BPepT1的表達(dá)量與瓣胃差異不顯著；回腸BPepT1的表達(dá)量與瘤胃(P＜0.05)差