牛催乳素載體在小鼠細胞系中的表達.pdf

1、催乳素(Prolactin, PRL)存在于所有已知的脊椎動物中,是哺乳動物乳腺發(fā)育和泌乳不可或缺的因子。PRL能促進多種乳蛋白的合成。研究證明bPRL可以有效增加外源基因在哺乳動物細胞中的表達。本實驗克隆得到牛催乳素啟動子(PRLP),包含bPRL轉錄起始位點5’端上游2.2kb的調控序列,其中包括了對bPRL基因高效表達至關重要的-1124至-985bp區(qū)域。本實驗使用全長9.4kb的牛催乳素基因組序列(GenBank登錄號:AF4

2、26315)作為目的基因,分別構建了以CMV啟動子(人巨細胞病毒啟動子,長800bp)、PRLP啟動子(牛催乳素基因啟動子,長2.2kb)和P1A3啟動子(山羊β-酪蛋白基因啟動子,長6.7kb)三種不同啟動子啟動的牛催乳素真核細胞表達載體。本實驗將上述三種牛催乳素表達載體分別轉染AtT20(小鼠垂體瘤細胞株)和HC11(小鼠乳腺上皮細胞株),通過RT-PCR和定量RT-PCR分析了三種啟動子指導下游牛催乳基因在兩種不同細胞系中的表達效

3、果。pCMV在兩種細胞中有效表達bPRL;pPRLP在兩種細胞中的表達效果與pCMV接近;pP1A3不在垂體細胞中表達,在乳腺細胞中表達。本實驗同時使用上述牛催乳素表達載體制備了轉基因小鼠。穩(wěn)定整合的牛催乳素基因能夠通過生殖細胞向子代傳遞。其中一只母鼠通過與人轉鐵蛋白(TF)轉基因小鼠配種,獲得一只bPRL++TF+雙重雜合子小鼠。本實驗通過分析不同啟動子載體在不同類型細胞中的表達水平,在細胞水平上比較不同啟動子對于牛催乳素表達的調控作