兒童急性呼吸道感染病毒病原學分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、[目的]
   1.建立一種能同時檢測多種呼吸道病毒的多重PCR方法,探討影響多重PCR擴增的因素。
   2.將建立的多重方法應用于檢測臨床兒童呼吸道標本,對多重方法進行評價,使多重方法能夠直接從臨床標本中檢測與鑒別相應的呼吸道病毒。
   3.了解臨床兒童呼吸道病毒感染常見病原體分布情況,采取有針對性治療措施,避免盲目用藥。對深圳、粵東地區(qū)兒童常見呼吸道病毒感染進行監(jiān)測、分析,并探討其流行規(guī)律。
  

2、 [方法]
   1標本采集與處理
   依據(jù)病情狀況和臨床表現(xiàn)采用不同的檢測標本,對以上呼吸道癥狀為主要表現(xiàn)的患者,選鼻咽分泌物為檢測標本;對以下呼吸道癥狀為主要表現(xiàn)的患者,首選支氣管肺泡灌洗標本,考慮到進行支氣管鏡操作具有一定制約因素,選擇痰標本進行病原學檢測。
   2引物設計
   通過查閱文獻,在GeneBank中分別找到呼吸道合胞病毒(Respiratorysyncytial virus,RS

3、V)、鼻病毒(Rhinovirus,RHV)、流感病毒A型(Influenza virus A,IVA)、流感病毒B型(Influenza virus B,IVB)、副流感病毒1型(Parainfluenza virus1,PIV1)、副流感病毒3型(Parainfluenza Virus3,PIV3)、偏肺病毒(Metapneumovirus,MPV)、腺病毒(Adenovirus,ADV)和博卡病毒(Bocavirus,BOV)9種

4、呼吸道病毒對應的特異基因序列,分析病毒基因組保守區(qū),根據(jù)保守區(qū)基因序列利用Primer5.0和Olig06.0軟件設計、評價引物。
   3多重PCR方法檢測兒童呼吸道常見病毒
   優(yōu)化反應體系,建立檢測DNA呼吸病毒和RNA呼吸病毒多重PCR篩查體系。陽性產(chǎn)物用測序引物二次擴增,經(jīng)測序予以確證。
   4統(tǒng)計學分析
   應用統(tǒng)計軟件SPSS13.0對計數(shù)資料進行卡方檢驗(X2 test),P<0.0

5、5為差異有統(tǒng)計學意義。
   [結果]
   1、所設計引物Tm值相近,在同一條件下均獲得較好的擴增。擴增片段大小有差異,能夠用瓊脂糖凝膠電泳的方法區(qū)分開來,引物均只對預期的片段進行擴增。
   2、根據(jù)實驗設計,我們主要探討了以下幾個影響反應的因素并進行了調(diào)整,包括退火溫度、緩沖液的濃度、酶、引物的濃度等。通過優(yōu)化以上條件,各對引物對應的條帶可以獲得比較均一的擴增。
   3、在686例標本中病毒陽性3

6、62例(52.77%),其中RSV感染占首位,達到31.22%(113/362),其次是RHV為16.85%(61/362),最低是IVB占0.83%(3/362),IVA占14.36%(52/362),PIV1和PIV3分別占7.73%(28/362)和8.29%(30/362),ADV達到9.67%(35/362),而BOV和MPV分別占6.08%(22/362)和4.97%(18/362)。本研究病例中兩種以上病毒感染者達9.3%

7、(64/686),以RSV、IVA聯(lián)合其他病毒感染為主,最多可見5種病毒合并感染。83例健康兒童對照組中,檢測出4例RHV和3例RSV,陽性分別為4.82%和3.61%;僅1例PIV3,陽性率為1.20%,其余均為陰性。
   4、研究發(fā)現(xiàn),RSV、RHV和IVA是重要的致病原。RSV陽性率分別達16.47%,經(jīng)統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)年齡之間差異有統(tǒng)計學意義。RHV和IVA陽性率分別達到8.89%和7.58%,統(tǒng)計后發(fā)現(xiàn)年齡之間差異均無統(tǒng)計學

8、意義。
   5、通過實驗室檢測結果分析,在深圳地區(qū)首先檢出BOV和MPV。
   [結論]
   1實驗證明,所建立多重PCR技術檢測兒童呼吸道標本中常見病毒的方法,敏感性、特異性和可重復性好,為常見呼吸道病毒的檢測提供了一種方便易行的方法。
   2 RSV、RHV及IVA是深圳、粵東地區(qū)兒童呼吸道感染的主要病毒病原,混合感染以RSV、IVA聯(lián)合其他病毒感染為主,診治時應根據(jù)所感染病原體制定有針對性的

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