誘生型一氧化氮合酶在狼瘡腎炎發(fā)病機制中的作用及甲潑尼龍、葛根素干預(yù)效應(yīng).pdf

1、目的:1)研究BXSB狼瘡鼠腎組織誘生型一氧化氮合酶(iNOS)的表達情況;2)探討甲潑尼龍和葛根素是否可通過抑制iNOS表達,減少NO合成而緩解狼瘡腎炎(LN).材料與方法:18只18周齡雄性BXSB自發(fā)性狼瘡小鼠隨機分成葛根組(n=6)、MPS組(n=6)和對照組(n=6);另隨機抽取同齡雄性BALB/c小鼠6只為正常小鼠(非狼瘡鼠)對照組.葛根素組小鼠每日腹腔注射葛根素50mg/(kg.d);MPS組小鼠每日腹腔注射MPS25mg

2、/(kg.d);BXSB小鼠對照組及BALB/c小鼠按體重每日同一時間腹腔注射等體積生理鹽水,連續(xù)三周.各組小鼠每周一次用代謝籠準(zhǔn)確收集24小時尿液.三周后斷頭取血、解剖,收集血標(biāo)本及腎臟.用雙縮脲法測定小鼠24小時尿蛋白;硝酸還原酶法測定小鼠24小時尿NO<,3><'->/NO<,2><'->排泄量;比色法測定小鼠血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;半定量RT-PCR法測定小鼠腎組織iNOS mRNA的表達;免疫組織化

3、學(xué)染色法觀察iNOS在腎組織中的表達部位.結(jié)果:1)BXSB小鼠MPS組及葛根素組用藥三周后24小時尿蛋白總量與BXSB對照組比較均明顯下降(P<0.01).2)BXSB小鼠MPS組與對照組相比,用藥后尿NO<,3><'->/NO<,2><'->排泄量顯著下降(P<0.05),且MPS組及對照組小鼠尿NO<,3><'->/NO<,2><'->排泄量與尿蛋白量呈正相關(guān)(r=0.681,P<0.01);葛根素組小鼠尿NO<,3><'->/N

4、O<,2><'->排泄則未見明顯下降(P>0.05).3)BXSB小鼠MPS組和葛根素組用藥后血清MDA水平低于對照組(P<0.01);BXSB小鼠血清MDA水平與尿蛋白量呈正相關(guān)(r=0.720,P<0.01).4)BXSB小鼠MPS組和葛根素組用藥后SOD水平均高于對照組(P<0.05),低于BALB/c小鼠(P<0.01).BXSB小鼠血清SOD水平與尿蛋白量呈負相關(guān)(r=-0.678,P<0.01).5)RT-PCR結(jié)果顯示,正

5、常BALB/c小鼠腎組織未檢測到iNOS表達,各組BXSB狼瘡小鼠均有明顯表達;MPS組腎組織iNOS表達水平顯著低于對照組(P<0.01);葛根素組腎組織iNOS的表達與對照組相比未見明顯下降(P>0.05).6)HE染色示BXSB小鼠腎組織表現(xiàn)為:腎小球細胞增生,體積明顯增大,腎小球囊腔狹窄,腎小管間質(zhì)及腎小球內(nèi)有炎癥細胞浸潤,腎小管上皮細胞腫脹、胞核脫落、壞死,細胞型新月體形成.免疫組織化學(xué)染色顯示:BXSB小鼠對照組腎小管上皮細

6、胞、腎小球和腎間質(zhì)浸潤的單核細胞胞漿有高水平的iNOS表達;MPS組各部位炎癥細胞浸潤減少且iNOS表達明顯減弱;葛根素組各部位炎癥細胞浸潤減少而iNOS表達未見減弱;BALB/c小鼠腎組織不表達iNOS.結(jié)論:1)iNOS及其合成的NO可能參與介導(dǎo)BXSB小鼠LN的發(fā)生發(fā)展.2)MPS可減輕BXSB小鼠蛋白尿,緩解LN.其機制可能是通過直接抑制BXSB小鼠腎組織iNOS的表達,減少NO合成;同時亦可通過抑制自由基(包括由NO衍生的氧自